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兩個基因序列能不能做熒光定量PCR？請教大家一下！�。�
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相似度為89%的兩個基因序列能不能做熒光定量PCR 我想做醇脫氫酶（ADH）基因的表達(dá)檢測，但ADH1與ADH2的基因序列有89%的相似度，請問各位高手：是否有辦法通過設(shè)計不同的引物把2段基因中相似度較低的序列P出來，定量PCR？ 我設(shè)計過引物，好像ADH1與ADH2兩條基因無法分開P出來，請大家解惑，謝謝！ |
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wanhscn
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2樓2011-08-27 21:33:00
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3樓2011-08-28 16:15:38
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+4, BioEPI+1): 想當(dāng)專業(yè)��！ 2011-08-28 20:21:44
amisking(金幣+4, BioEPI+1): 想當(dāng)專業(yè)��！ 2011-08-28 20:21:44
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1.建議用探針法，設(shè)計引物理論上可以區(qū)別開差異。但是real-time引物質(zhì)量還是有點要求的，很可能那僅有的差異序列不適合做引物（CT值低，TM低，有錯配等等。） 2.探針法，比如：AB公司的Teq MAN 探針有一個專利，就是RGB小溝結(jié)合物（可提高局部TM）。因此它可以很好地區(qū)別差異序列，理論上13-18bp大小的探針序列中只要有2個堿基不同就能很好區(qū)分。雜志認(rèn)可度高，方便今后投文章。 3.如果樓主沒做過real-time。探針法的好處就更多了，你直接給序列給公司，公司一條龍服務(wù)。自己跑個PCR就好，省了實驗設(shè)計階段。 |
4樓2011-08-28 18:10:35
wanhscn
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5樓2011-08-28 19:45:10
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