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怎么P出單鏈DNA？
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blackrose8089
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2樓2011-09-01 11:42:33
3樓2011-09-01 12:30:16
4樓2011-09-01 13:20:17
blackrose8089
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5樓2011-09-01 16:11:08
xgxofdream
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6樓2011-09-01 20:42:45
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7樓2011-09-02 16:59:09
8樓2011-09-03 09:33:04
xgxofdream
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+6, MolEPI+1): Good!回答很詳細(xì)，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金幣+20): 2011-09-05 08:17:44
西瓜(金幣+6, MolEPI+1): Good!回答很詳細(xì)，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金幣+20): 2011-09-05 08:17:44
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其實(shí)那也不是什么很好的方法，如果你單純是為了得到ssDNA做陽(yáng)性對(duì)照的話，十分建議合成。如果你是為了建立某種檢測(cè)方案的話... 目前擴(kuò)增產(chǎn)物是單鏈的DNA擴(kuò)增方法有：NASBA，SDA，RCA等等溫?cái)U(kuò)增方案。這些你可以去google上搜索。 我提到的那個(gè)方法比較復(fù)雜，也費(fèi)錢(qián)： 1）首先 合成引物的時(shí)候，將其中一個(gè)引物（上游或者下游引物）的5‘end用ddNTP封閉住。（生工可以合成，另加500大洋的修飾費(fèi)） 2）正常PCR程序 3）購(gòu)買(mǎi)T7 外切酶或者lamada外切酶（www.neb-china.com上有賣(mài)，大概670多大洋） 4）用上述酶消化你的PCR產(chǎn)物，由于ddNTP-5’-Primer的存在，你的dsDNA產(chǎn)物中有一條鏈的5‘ end是被ddNTP封閉的，所以酶只能消化其中的一條鏈，所以最終你得到了單鏈。 注意：我建議用biotin代替ddNTP封閉引物的5’end。因?yàn)槲也磺宄甘欠駥?duì)ddNTP敏感。 |
9樓2011-09-04 15:36:44
xgxofdream
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10樓2011-09-04 15:39:05
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