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[求助]
怎么P出單鏈DNA？
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| 我們實驗室需要單鏈DNA做實驗，有什么好的方法得到單鏈DNA？非常緊急，請各位大俠幫助。 |
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xgxofdream
銀蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+6, MolEPI+1): Good!回答很詳細(xì)，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金幣+20): 2011-09-05 08:17:44
西瓜(金幣+6, MolEPI+1): Good!回答很詳細(xì)，辛苦了哦！ 2011-09-04 18:49:23
lyqifeih(金幣+20): 2011-09-05 08:17:44
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其實那也不是什么很好的方法，如果你單純是為了得到ssDNA做陽性對照的話，十分建議合成。如果你是為了建立某種檢測方案的話... 目前擴(kuò)增產(chǎn)物是單鏈的DNA擴(kuò)增方法有：NASBA，SDA，RCA等等溫擴(kuò)增方案。這些你可以去google上搜索。 我提到的那個方法比較復(fù)雜，也費錢： 1）首先 合成引物的時候，將其中一個引物（上游或者下游引物）的5‘end用ddNTP封閉住。（生工可以合成，另加500大洋的修飾費） 2）正常PCR程序 3）購買T7 外切酶或者lamada外切酶（www.neb-china.com上有賣，大概670多大洋） 4）用上述酶消化你的PCR產(chǎn)物，由于ddNTP-5’-Primer的存在，你的dsDNA產(chǎn)物中有一條鏈的5‘ end是被ddNTP封閉的，所以酶只能消化其中的一條鏈，所以最終你得到了單鏈。 注意：我建議用biotin代替ddNTP封閉引物的5’end。因為我不清楚酶是否對ddNTP敏感。 |
9樓2011-09-04 15:36:44
blackrose8089
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2樓2011-09-01 11:42:33
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