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[求助]
放線菌分子生物學(xué)鑒定
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我提取的放線菌總DNA用通用引物擴(kuò)增目的序列，測序結(jié)果如下： 您的PCR樣品 (2) （使用27F/1492R 引物 ）測序后發(fā)現(xiàn)有重疊現(xiàn)象,我們懷疑是由以下幾個(gè)方面的原因造成的： 1.已純化的PCR樣品造成這種情況的原因是由于模板純化有一定問題，模板中含有非特異性的條帶； 2.如果是未純化的PCR產(chǎn)物，那么有可能是您要求測序的片段周圍含有大小相近的條帶，我們通過瓊脂糖凝膠回收，無法有效切除這種大小差別不是很明顯的條帶； 3.模板或是引物質(zhì)量較差，測序反應(yīng)結(jié)束之后沒有產(chǎn)生足夠的目的產(chǎn)物，導(dǎo)致測序信號較弱，雜背景較高，形成重疊現(xiàn)象。 這些原因都可能造成PCR樣品測序之后出現(xiàn)重疊現(xiàn)象.建議您改進(jìn)后重新進(jìn)行測序。 以上是測序公司的反饋，該怎么解決這些問題呢，謝謝大家。 |
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wy936619197y
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- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
樓主可以說說你提放線菌DNA的過程嗎？前期液體培養(yǎng)多久？怎樣破壁的？如果用TE和溶菌酶處理37℃多久才能破壁？幫幫忙吧，失敗好多次，快無語了
9樓2016-06-13 12:49:52
2樓2011-09-04 10:19:54
3樓2011-09-04 10:52:26
4樓2011-09-04 10:59:47
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