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lh_imm木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助關于大鼠急性心肌缺血模型的問題
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| 課題目前需要評價某個藥物對大鼠急性心肌缺血的保護作用，現在發(fā)現造成大鼠急性心肌缺血有兩種方法，一種是注射異丙腎上腺素（或者垂體后葉素）的藥物造模法，另一種是結扎冠狀動脈左前降支的手術造模法，不知這兩種方法造成的模型有何異同，請有經驗蟲友介紹一下，謝謝~ |
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coolsongerun
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karl2100(金幣+1): 謝謝提供！ 2011-10-21 10:10:38
karl2100(金幣+1): 謝謝提供！ 2011-10-21 10:10:38
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心肌梗死實驗方法交流 一、兒茶酚胺引起心肌壞死模型 [造模機制] 兒茶酚胺通過收縮冠狀動脈、增強心肌收縮力和增加心肌耗氧量等多方面機制誘發(fā)心肌壞死。 [實驗動物] 常用體重100~200g大鼠，性別不限。 [器材與試劑] 帶針形電極的心電圖機或示波器，或生理記錄儀。 兒茶酚胺：常用異丙基腎上腺素水溶液，也可用去甲基腎上腺素。 [操作步驟] 需及時描記心電圖時可事先將大鼠用乙醚輕度麻醉，仰臥位將頭和四肢固定，用胸導聯、Ⅱ導聯記錄心電圖。也可先注藥，然后定時觀察心電變化。 于大鼠后肢大腿內側皮下注射（也可腹腔注射）異丙基腎上腺素水溶液，每日1次，每次劑量按1~10mg/kg體重，連續(xù)注射2d。每次注射后1、5、10、30、45……min均可記錄心電圖，觀察急性心肌缺血改變。 一般首次注射后第3~4d即形成境界清晰的心肌壞死灶，第7d病灶內成纖維細胞明顯增多，第3周后進入心肌纖維化階段。 [病變特點] 末次注射后48h做心臟病理檢查，絕大多數動物均可見到境界清楚的心肌壞死灶。這類病灶有的是清凈少細胞的壞死后空架；更多的是巨噬細胞反應強烈、成纖維細胞增生旺盛的多細胞病灶。壞死灶主要分布在左心室壁和室間隔上，尤以靠近心尖部為重。通常較大的病灶多分布在乳頭肌及內層心肌，而中、外層心肌病灶一般較小。在心壁內層的病灶可見緊貼心內膜下常保留1~2條未壞死的心肌細胞，但這種保留不如典型心肌梗死那樣完全，有的部位壞死可直達心內膜。心肌壞死灶常圍繞冠狀動脈小分支分布。 心肌壞死或纖維化的范圍可用圖像分析系統(tǒng)計量觀察，心肌纖維化還可以做膠原含量的檢測。 [模型評價] 兒茶酚胺致心肌壞死模型的復制方法簡便，效果穩(wěn)定可靠。兒茶酚胺具有收縮冠狀動脈、增強心肌收縮力等多方面的作用，在心肌壞死的病理特點和發(fā)生機制上與人類缺血缺氧性心肌缺死有某些類似之處。此類模型可用于心肌壞死、心肌纖維化的發(fā)生機制和藥物篩選等實驗研究。 二、垂體后葉素引起心肌壞死模型 [造模機制] 垂體后葉素能強烈收縮冠狀動脈，從而引起心肌缺血缺氧性壞死。 [實驗動物] 成年大鼠或家兔，本節(jié)以大鼠為例，性別不限。 [操作步驟] 描記心電圖的處理同前。 于大鼠大腿外側肌肉注射垂體后葉素（即血管加壓素，pitressin, vasopressin）注射液，每日1次，每次劑量為10~20 U/kg體重，連續(xù)注射2d。 每次注射后1、5、10、30……min，用帶針形電極的心電圖機描記心電圖，觀察心肌急性缺血改變。 注射垂體后葉素后心肌出現壞死和纖維化的時序與異丙基腎上腺素引起的大鼠心肌壞死大致相近，可于末次注射后第2d、第1周、第3周取心臟進行病理觀察。 [病變特點] 末次注射后48h取心臟做病理檢查，多數大鼠心肌內發(fā)生多發(fā)性小灶狀心肌壞死，壞死灶內心肌細胞消失，出現大量巨噬細胞及成纖維細胞。壞死灶一般都很小，以左心室壁的內、中層和室間隔為最多。少數動物在心室壁可形成典型的大片狀、帶狀梗死，梗死灶內心肌凝固性壞死伴有出血，心內膜下可保留一薄層未壞死的心肌細胞。 [模型評價] 本模型可用于缺血缺氧性心肌損害的發(fā)生機理、防治方法的實驗研究。從病理模型來講，垂體后葉素引起心肌壞死的范圍與數量在不同的動物個體之間差別較大，不如異丙基腎上腺素引起的心肌壞死穩(wěn)定。 三、結扎冠狀動脈引起心肌梗死模型 結扎冠狀動脈大支造成心肌梗死，以往常用犬、豬等為實驗對象，但有費用昂貴、飼養(yǎng)不便等缺點，故近年來轉而多用小動物。用大鼠制造心肌梗死的方法，經Selye簡化、Bajusz改進而趨于成熟，現在國內外已普遍使用。這里以大鼠為例進行介紹。 [造模機制] 結扎動物的左冠狀動脈前降支引起所供血區(qū)域的心肌梗死。梗死發(fā)生快、缺血的區(qū)域大致固定，并可進行動力學、心電圖監(jiān)視、組織學檢查和血清酶學等指標，綜合評價梗死范圍和損傷程度。 [實驗動物] 一般選用體重200~300g大鼠，性別不限。 [器材與試劑] 大鼠專用氣管插管與微型人工呼吸器 [操作步驟] 乙醚麻醉大鼠，仰臥位固定，胸部剪毛，碘酒-酒精消毒皮膚。 有條件時使用氣管插管，連接微型人工呼吸器，安置體表心電圖進行監(jiān)視。不用氣管插管也可進行此類手術，只是手術的安全性較差。 在胸骨左側與胸骨平行作一縱行切口，切開皮膚及胸大肌，暴露肋骨。在距胸骨約0.5cm外剪斷第5、6肋軟骨，打開胸腔，剪開心包，暴露心臟。輕壓胸廓即可將心臟擠出胸腔外。Bajusz介紹的方法只剪斷第6肋軟骨，或不切斷肋軟骨，只是把第5和第6肋軟骨之間的間隙用鑷子加以擴寬，也可將心臟擠出來。 大鼠冠狀動脈自主動脈分出后即進入心肌，肉眼很難識別，需借助解剖標志確定其位置。如需結扎左冠狀動脈，在心臟擠出后用左手的拇指和食指夾住鼠心，心尖指向頭側稍偏右。用小彎針穿000000號絲線，從肺動脈圓錐左緣進入，從此進入點和左心耳根部假想聯線的中間穿出，連同線穿過的心肌一并結扎。結扎部位大約距左冠狀動脈開口下1mm。如需結扎右冠狀動脈，用特制的拉開器拉開右心耳，在肺動脈圓錐右緣，靠近主動脈的室壁結扎。結扎后將心臟放回胸腔。 用心電圖監(jiān)視，判定結扎成功后，用切開胸腔時已預留的縫合線緊閉胸壁�？p合皮膚。撤掉氣管插管及心電電極。 在結扎的當時心電圖即顯示急性缺血改變，如II導R波高尖、ST段抬高、Q波出現和加深等。結扎24h后光鏡下可判斷心肌梗死改變；結扎后第4~7d梗死灶周邊即有活躍的肌成纖維細胞和成纖維細胞增生；第2~3周進入修復性纖維化階段；第4周可形成肉眼能看出的瘢痕。 [病變特點] 在結扎后短時間、光鏡下心肌梗死病變尚未充分發(fā)展之前，可用心臟標本組織化學染色顯示心肌缺血造成的脫氫酶活性脫失。例如將心肌組織放入新配制的鹽酸硝基四氮唑藍溶液中，正常心肌呈藍色，梗死心肌不著色。并可藉以計算梗死范圍。 在結扎后第3~4d，光鏡下可見心肌梗死的典型改變：①梗死灶的中心部位，心肌細胞和心肌間質一并陷于凝固性壞死，壞死肌細胞嗜伊紅濃染，核破裂消失。有些部位可見間質出血或中性白細胞浸潤。②梗死灶的外周部分，有的部位可見心肌細胞的收縮帶壞死（contraction-band necrosis）和凝固性肌溶解（coagulative myocytolysis）。③在梗死灶的周圍，有的部位可見一帶心肌細胞出現空泡變性，甚至陷入液化性肌溶解（colliquative myocytolysis）。④梗死部位的心內膜下層、靜脈竇的周圍，常保留一薄層未陷于壞死或僅有空泡變性—液化性肌溶解的心肌細胞。 [模型評價] 結扎冠狀動脈的心肌梗死模型效果確實，可用于冠心病心肌梗死的發(fā)生機理、防治方法的實驗研究。用大鼠進行這類手術的死亡率與操作的熟練程度以及人工呼吸裝置采用與否有關。一般術后成活率可達60%或更高，有的資料稱術后24h雄鼠死亡率約為38%，雌鼠為20%。 |
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