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lh_imm木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助關(guān)于大鼠急性心肌缺血模型的問題
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| 課題目前需要評(píng)價(jià)某個(gè)藥物對(duì)大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)造成大鼠急性心肌缺血有兩種方法，一種是注射異丙腎上腺素（或者垂體后葉素）的藥物造模法，另一種是結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支的手術(shù)造模法，不知這兩種方法造成的模型有何異同，請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)蟲友介紹一下，謝謝~ |
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郭_Robinson
銅蟲 (初入文壇)
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5樓2013-10-17 15:56:20
coolsongerun
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2樓2011-10-20 22:06:14
coolsongerun
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karl2100(金幣+1): 謝謝提供！ 2011-10-21 10:10:38
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心肌梗死實(shí)驗(yàn)方法交流 一、兒茶酚胺引起心肌壞死模型 [造模機(jī)制] 兒茶酚胺通過收縮冠狀動(dòng)脈、增強(qiáng)心肌收縮力和增加心肌耗氧量等多方面機(jī)制誘發(fā)心肌壞死。 [實(shí)驗(yàn)動(dòng)物] 常用體重100~200g大鼠，性別不限。 [器材與試劑] 帶針形電極的心電圖機(jī)或示波器，或生理記錄儀。 兒茶酚胺：常用異丙基腎上腺素水溶液，也可用去甲基腎上腺素。 [操作步驟] 需及時(shí)描記心電圖時(shí)可事先將大鼠用乙醚輕度麻醉，仰臥位將頭和四肢固定，用胸導(dǎo)聯(lián)、Ⅱ?qū)?lián)記錄心電圖。也可先注藥，然后定時(shí)觀察心電變化。 于大鼠后肢大腿內(nèi)側(cè)皮下注射（也可腹腔注射）異丙基腎上腺素水溶液，每日1次，每次劑量按1~10mg/kg體重，連續(xù)注射2d。每次注射后1、5、10、30、45……min均可記錄心電圖，觀察急性心肌缺血改變。 一般首次注射后第3~4d即形成境界清晰的心肌壞死灶，第7d病灶內(nèi)成纖維細(xì)胞明顯增多，第3周后進(jìn)入心肌纖維化階段。 [病變特點(diǎn)] 末次注射后48h做心臟病理檢查，絕大多數(shù)動(dòng)物均可見到境界清楚的心肌壞死灶。這類病灶有的是清凈少細(xì)胞的壞死后空架；更多的是巨噬細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)烈、成纖維細(xì)胞增生旺盛的多細(xì)胞病灶。壞死灶主要分布在左心室壁和室間隔上，尤以靠近心尖部為重。通常較大的病灶多分布在乳頭肌及內(nèi)層心肌，而中、外層心肌病灶一般較小。在心壁內(nèi)層的病灶可見緊貼心內(nèi)膜下常保留1~2條未壞死的心肌細(xì)胞，但這種保留不如典型心肌梗死那樣完全，有的部位壞死可直達(dá)心內(nèi)膜。心肌壞死灶常圍繞冠狀動(dòng)脈小分支分布。 心肌壞死或纖維化的范圍可用圖像分析系統(tǒng)計(jì)量觀察，心肌纖維化還可以做膠原含量的檢測(cè)。 [模型評(píng)價(jià)] 兒茶酚胺致心肌壞死模型的復(fù)制方法簡便，效果穩(wěn)定可靠。兒茶酚胺具有收縮冠狀動(dòng)脈、增強(qiáng)心肌收縮力等多方面的作用，在心肌壞死的病理特點(diǎn)和發(fā)生機(jī)制上與人類缺血缺氧性心肌缺死有某些類似之處。此類模型可用于心肌壞死、心肌纖維化的發(fā)生機(jī)制和藥物篩選等實(shí)驗(yàn)研究。 二、垂體后葉素引起心肌壞死模型 [造模機(jī)制] 垂體后葉素能強(qiáng)烈收縮冠狀動(dòng)脈，從而引起心肌缺血缺氧性壞死。 [實(shí)驗(yàn)動(dòng)物] 成年大鼠或家兔，本節(jié)以大鼠為例，性別不限。 [操作步驟] 描記心電圖的處理同前。 于大鼠大腿外側(cè)肌肉注射垂體后葉素（即血管加壓素，pitressin, vasopressin）注射液，每日1次，每次劑量為10~20 U/kg體重，連續(xù)注射2d。 每次注射后1、5、10、30……min，用帶針形電極的心電圖機(jī)描記心電圖，觀察心肌急性缺血改變。 注射垂體后葉素后心肌出現(xiàn)壞死和纖維化的時(shí)序與異丙基腎上腺素引起的大鼠心肌壞死大致相近，可于末次注射后第2d、第1周、第3周取心臟進(jìn)行病理觀察。 [病變特點(diǎn)] 末次注射后48h取心臟做病理檢查，多數(shù)大鼠心肌內(nèi)發(fā)生多發(fā)性小灶狀心肌壞死，壞死灶內(nèi)心肌細(xì)胞消失，出現(xiàn)大量巨噬細(xì)胞及成纖維細(xì)胞。壞死灶一般都很小，以左心室壁的內(nèi)、中層和室間隔為最多。少數(shù)動(dòng)物在心室壁可形成典型的大片狀、帶狀梗死，梗死灶內(nèi)心肌凝固性壞死伴有出血，心內(nèi)膜下可保留一薄層未壞死的心肌細(xì)胞。 [模型評(píng)價(jià)] 本模型可用于缺血缺氧性心肌損害的發(fā)生機(jī)理、防治方法的實(shí)驗(yàn)研究。從病理模型來講，垂體后葉素引起心肌壞死的范圍與數(shù)量在不同的動(dòng)物個(gè)體之間差別較大，不如異丙基腎上腺素引起的心肌壞死穩(wěn)定。 三、結(jié)扎冠狀動(dòng)脈引起心肌梗死模型 結(jié)扎冠狀動(dòng)脈大支造成心肌梗死，以往常用犬、豬等為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，但有費(fèi)用昂貴、飼養(yǎng)不便等缺點(diǎn)，故近年來轉(zhuǎn)而多用小動(dòng)物。用大鼠制造心肌梗死的方法，經(jīng)Selye簡化、Bajusz改進(jìn)而趨于成熟，現(xiàn)在國內(nèi)外已普遍使用。這里以大鼠為例進(jìn)行介紹。 [造模機(jī)制] 結(jié)扎動(dòng)物的左冠狀動(dòng)脈前降支引起所供血區(qū)域的心肌梗死。梗死發(fā)生快、缺血的區(qū)域大致固定，并可進(jìn)行動(dòng)力學(xué)、心電圖監(jiān)視、組織學(xué)檢查和血清酶學(xué)等指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)梗死范圍和損傷程度。 [實(shí)驗(yàn)動(dòng)物] 一般選用體重200~300g大鼠，性別不限。 [器材與試劑] 大鼠專用氣管插管與微型人工呼吸器 [操作步驟] 乙醚麻醉大鼠，仰臥位固定，胸部剪毛，碘酒-酒精消毒皮膚。 有條件時(shí)使用氣管插管，連接微型人工呼吸器，安置體表心電圖進(jìn)行監(jiān)視。不用氣管插管也可進(jìn)行此類手術(shù)，只是手術(shù)的安全性較差。 在胸骨左側(cè)與胸骨平行作一縱行切口，切開皮膚及胸大肌，暴露肋骨。在距胸骨約0.5cm外剪斷第5、6肋軟骨，打開胸腔，剪開心包，暴露心臟。輕壓胸廓即可將心臟擠出胸腔外。Bajusz介紹的方法只剪斷第6肋軟骨，或不切斷肋軟骨，只是把第5和第6肋軟骨之間的間隙用鑷子加以擴(kuò)寬，也可將心臟擠出來。 大鼠冠狀動(dòng)脈自主動(dòng)脈分出后即進(jìn)入心肌，肉眼很難識(shí)別，需借助解剖標(biāo)志確定其位置。如需結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，在心臟擠出后用左手的拇指和食指夾住鼠心，心尖指向頭側(cè)稍偏右。用小彎針穿000000號(hào)絲線，從肺動(dòng)脈圓錐左緣進(jìn)入，從此進(jìn)入點(diǎn)和左心耳根部假想聯(lián)線的中間穿出，連同線穿過的心肌一并結(jié)扎。結(jié)扎部位大約距左冠狀動(dòng)脈開口下1mm。如需結(jié)扎右冠狀動(dòng)脈，用特制的拉開器拉開右心耳，在肺動(dòng)脈圓錐右緣，靠近主動(dòng)脈的室壁結(jié)扎。結(jié)扎后將心臟放回胸腔。 用心電圖監(jiān)視，判定結(jié)扎成功后，用切開胸腔時(shí)已預(yù)留的縫合線緊閉胸壁�？p合皮膚。撤掉氣管插管及心電電極。 在結(jié)扎的當(dāng)時(shí)心電圖即顯示急性缺血改變，如II導(dǎo)R波高尖、ST段抬高、Q波出現(xiàn)和加深等。結(jié)扎24h后光鏡下可判斷心肌梗死改變；結(jié)扎后第4~7d梗死灶周邊即有活躍的肌成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增生；第2~3周進(jìn)入修復(fù)性纖維化階段；第4周可形成肉眼能看出的瘢痕。 [病變特點(diǎn)] 在結(jié)扎后短時(shí)間、光鏡下心肌梗死病變尚未充分發(fā)展之前，可用心臟標(biāo)本組織化學(xué)染色顯示心肌缺血造成的脫氫酶活性脫失。例如將心肌組織放入新配制的鹽酸硝基四氮唑藍(lán)溶液中，正常心肌呈藍(lán)色，梗死心肌不著色。并可藉以計(jì)算梗死范圍。 在結(jié)扎后第3~4d，光鏡下可見心肌梗死的典型改變：①梗死灶的中心部位，心肌細(xì)胞和心肌間質(zhì)一并陷于凝固性壞死，壞死肌細(xì)胞嗜伊紅濃染，核破裂消失。有些部位可見間質(zhì)出血或中性白細(xì)胞浸潤。②梗死灶的外周部分，有的部位可見心肌細(xì)胞的收縮帶壞死（contraction-band necrosis）和凝固性肌溶解（coagulative myocytolysis）。③在梗死灶的周圍，有的部位可見一帶心肌細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，甚至陷入液化性肌溶解（colliquative myocytolysis）。④梗死部位的心內(nèi)膜下層、靜脈竇的周圍，常保留一薄層未陷于壞死或僅有空泡變性—液化性肌溶解的心肌細(xì)胞。 [模型評(píng)價(jià)] 結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的心肌梗死模型效果確實(shí)，可用于冠心病心肌梗死的發(fā)生機(jī)理、防治方法的實(shí)驗(yàn)研究。用大鼠進(jìn)行這類手術(shù)的死亡率與操作的熟練程度以及人工呼吸裝置采用與否有關(guān)。一般術(shù)后成活率可達(dá)60%或更高，有的資料稱術(shù)后24h雄鼠死亡率約為38%，雌鼠為20%。 |
3樓2011-10-20 22:08:43
kaylee
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4樓2012-06-07 09:02:26
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