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芥末蠶豆銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌ET12567
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我將構(gòu)建好的一個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌ET12567,用的是CaCl2法制備ET12567感受態(tài)，菌液PCR驗(yàn)證、提取質(zhì)粒酶切驗(yàn)證均正確，將驗(yàn)證正確的菌用20％甘油保存在－20度； 此時(shí)問(wèn)題出現(xiàn)了：將甘油保藏管菌液重新接LB小試管（含抗性），提質(zhì)粒，但是此時(shí)卻見(jiàn)不到質(zhì)粒的條帶了，Why？（ps:提質(zhì)粒用的試劑是別人剛剛提過(guò)質(zhì)粒的，應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題；LB小試管菌長(zhǎng)得很好很正常）。我也試過(guò)將甘油保藏管菌液先在LB（含同樣抗生素）平板活化，然后再接小試管提質(zhì)粒，結(jié)果電泳也沒(méi)見(jiàn)到我所要的質(zhì)粒條帶（PS：電泳和別人一起跑的，別人的有條帶，電泳應(yīng)該是沒(méi)問(wèn)題的） 有沒(méi)有高手比較連接這個(gè)菌種！非常感謝！ |
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瓶?jī)夯?/font>
金蟲(chóng) (小有名氣)
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4樓2011-09-20 14:29:14
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至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2011-09-20 07:26:31
芥末蠶豆
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2011-09-20 14:40:18
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