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[交流]
大腸桿菌發(fā)酵液的防菌
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| 弄了一批大腸桿菌（工程菌）的發(fā)酵液，pH6.5，加什么防菌比較好，可能起始的菌落總數(shù)有10的8次方，因?yàn)殡x心分離的轉(zhuǎn)速很低4500，希望大家能多多提些建議，謝謝啦！ |
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 大腸桿菌工程菌發(fā)酵 |
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2樓2011-10-20 12:02:40
susizheng
木蟲 (著名寫手)
- MicEPI: 1
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3樓2011-10-20 16:19:52
4樓2011-10-20 21:36:32
5樓2011-10-20 21:37:28
6樓2011-10-21 08:26:26
zhang8826857
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- MicEPI: 9
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wu2008yao(金幣+1): 我要發(fā)酵液而非菌種，不過謝謝了！ 2011-10-21 09:39:19
scelab(金幣+5): 辛苦總結(jié)了，不過確實(shí)不是。lz所問。要不你單獨(dú)把此內(nèi)容開貼，呵呵 2011-10-21 11:36:49
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
wu2008yao(金幣+1): 我要發(fā)酵液而非菌種，不過謝謝了！ 2011-10-21 09:39:19
scelab(金幣+5): 辛苦總結(jié)了，不過確實(shí)不是。lz所問。要不你單獨(dú)把此內(nèi)容開貼，呵呵 2011-10-21 11:36:49
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這是我總結(jié)了好多人的觀點(diǎn)，也有我自己的觀點(diǎn)，你看看吧，應(yīng)該對(duì)你有用處。或者你把你的菌先平板畫線分離，然后進(jìn)行保藏，效果肯定非常的好。^_^還有好幾篇關(guān)于菌種保藏的資料，看看吧^_^ 如果用50%甘油生理鹽水可保存更長(zhǎng)時(shí)間。 如果有條件的話，菌種最好保存在－70，30－50％甘油可以保存半年左右。另外，如果是表達(dá)基因重組蛋白那就多提點(diǎn)質(zhì)粒吧，質(zhì)粒很容易保存，菌種不行了及時(shí)轉(zhuǎn)化，反正也不麻煩。 本人的菌種負(fù)７０度保存了N年一點(diǎn)問題都沒有。負(fù)２０度冰柜也問題不大。最怕的是那種有冷凍冷藏的冰箱，兩三個(gè)月肯定基本完完。我們實(shí)驗(yàn)室的都保存了一兩年都?jí)褖训模M(jìn)甘油管前的菌濃度要濃縮一點(diǎn)。我實(shí)驗(yàn)室的保存3年也沒有問題，我認(rèn)為主要是你的冰箱溫度不夠低，一般用30~50%的甘油在-30℃以下的冰箱可以保存幾年。-20℃的冰箱肯定保存不了多久. 不要反復(fù)凍融！ 穩(wěn)定的低溫對(duì)甘油保存是很重要的。 其實(shí)，如果果真要長(zhǎng)期保存菌種，最好就是凍干保存。 如果短期保存，做穿刺管幾個(gè)月是沒有問題的，4度保存就可以，制作和保存都很方便。 終濃度15%左右的甘油管-20保存三四個(gè)月問題不大，半年就不太好了 甘油的濃度在20-50%這個(gè)范圍就可以，但關(guān)鍵是溫度最好是在-70℃以下，其保存時(shí)間至少在1年以上。要長(zhǎng)期保存的話，凍干保存是最理想的了。 我們用的甘油的濃度在20%，保存在－80℃的冰箱里，可以長(zhǎng)期保存。注意在保存時(shí)菌液和甘油要混溶。 用滅菌的濾紙片涂上大腸桿菌，放進(jìn)滅菌的一次性塑料尖咀離心管（1.5ml）內(nèi)，置普通冰箱的冷凍室冷凍保存，此種保存方法可將菌種保存至少一年半以上，不妨試一試。 最好的辦法就是把它進(jìn)行凍干,可以保存數(shù)年不減毒力,我的大腸桿菌凍干保存了七年還好著呢. 最好的辦法就是把它進(jìn)行凍干,可以保存數(shù)年不減毒力,我的大腸桿菌凍干保存了七年還好著呢. 我用20%甘油肉湯，在-80 保存多年，且反復(fù)動(dòng)融，至今長(zhǎng)的很好 20%-50%的濃度是不是高了點(diǎn)��？實(shí)驗(yàn)室的某些質(zhì)粒感覺用25%的甘油保存，放幾個(gè)月就OVER了�。� 用甘油保存于－70度，取出接種時(shí)，不要等它完全凍融，部分凍融后立即接種，剩下部分立即再置回冰箱中，這可避免反復(fù)凍融帶來的對(duì)細(xì)菌的破壞。 |
7樓2011-10-21 08:37:23
8樓2011-10-22 10:43:00
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