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追夢(mèng)的人1987

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大家誰用Tris-飽和酚提過蛋白啊，有沒有具體的操作步驟啊，我看文獻(xiàn)上的說法不一，大家一般都怎么操作啊，

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1樓 2011-09-21 19:29:52

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【答案】應(yīng)助回帖

追夢(mèng)的人1987(金幣+2): 2011-09-22 08:57:27

恩我做過不過是提取植物蛋白根據(jù)文獻(xiàn)然后自己稍微修改提出來的蛋白經(jīng)過濃度測(cè)定覺得還行吧

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2樓2011-09-21 19:42:39

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 小娶個(gè)木 at 2011-09-21 19:42:39:
恩我做過不過是提取植物蛋白根據(jù)文獻(xiàn)然后自己稍微修改提出來的蛋白經(jīng)過濃度測(cè)定覺得還行吧

能不能給我說一下具體步驟啊

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3樓2011-09-22 08:57:52

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3樓: Originally posted by 追夢(mèng)的人1987 at 2011-09-22 08:57:52:
能不能給我說一下具體步驟啊

好的

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4樓2011-09-22 11:01:47

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小娶個(gè)木

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【答案】應(yīng)助回帖

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silicare(金幣+10, BioEPI+1): 2011-09-23 17:50:13

對(duì)了你是要中文版還是因?yàn)榘姹景。?算了，估計(jì)你還是小妹妹，還是給你發(fā)中文版吧，個(gè)人試驗(yàn)，若有誤差，不怪我

二、水稻蛋白提取
樣品處理：水稻根部及葉片部分
磨樣：液氮保護(hù)下磨至細(xì)粉，分裝至各離心管中，約2g；
蛋白提�。罕椒臃�
1、取分裝好的樣品約2.0g，加入EB1 6ml，PVPP 0.02g，PMSF 60ul，β-巰基乙醇120ul，Na3VO4、NaF 各6 ul；
注：
EB1: 0.7 M蔗糖、0.1 M的氯化鉀、0.5 M Tris鹽酸、10 mM EDTA，pH 7.5，
1%聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），即(樣品量的2%)2.0*1%=0.02g;
1mM  PMSF：用異丙醇配制成100mM 母液貯存于冰箱中錫箔紙待用，每次用完即扔掉，用時(shí)根據(jù)EB1的總體積進(jìn)行稀釋，如本例中為6ml，則取母液60ul 加入到離心管中，則濃度為60*100/6000=1mM
2 %的β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol）（v/v）：如本例中EB1 為6ml，則6*2%=120ul
0.2mM Na3VO4：配成0.2mmol/ml 母液，用時(shí)稀釋即可，稱取Na3VO4  0.03678g溶于1ml水，此時(shí)母液濃度為0.2 mmol/ml，如本例中EB1 為6ml，則需取6ul，6*0.2/6=0.2 mM
1 mM NaF：配成1mmol/ml 母液，用時(shí)稀釋即可，稱取NaF  0.042g溶于1ml水，此時(shí)母液濃度為1mmol/ml，如本例中EB1 為6ml，則需取6ul，6*1/6=1mM
2、低溫斡旋10min（用冰盒保持溫度在較低溫度）
3、取出，加入水飽和苯酚6ml，同步驟2，低溫斡旋10min，
4、用EB1 配平各管，在T=4℃，10000g 條件下離心40min；
5、將上層酚相吸出至另管中，加入5倍體積醋酸銨飽和甲醇溶液，置于-20℃冰箱過夜沉淀，
6、次日取出，配平后同樣條件下離心40min，棄掉上清液，用冷丙酮清洗三遍，前兩遍離心10min，后一遍離心20min，用氮?dú)獯蹈纱?br /> 這是我試驗(yàn)本上的  一個(gè)字一個(gè)字幫你打印出來了

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5樓2011-09-22 11:05:36

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5樓: Originally posted by 小娶個(gè)木 at 2011-09-22 11:05:36:
對(duì)了你是要中文版還是因?yàn)榘姹景。?算了，估計(jì)你還是小妹妹，還是給你發(fā)中文版吧，個(gè)人試驗(yàn)，若有誤差，不怪我

二、水稻蛋白提取
樣品處理：水稻根部及葉片部分
磨樣：液氮保護(hù)下磨至細(xì)粉，分裝至各離 ...

太感謝了，可是你提的蛋白是用于雙向嗎，我怎么感覺這溶液里面的鹽離子濃度太高了，到時(shí)會(huì)影響雙向嗎

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6樓2011-09-23 09:31:47

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6樓: Originally posted by 追夢(mèng)的人1987 at 2011-09-23 09:31:47:
太感謝了，可是你提的蛋白是用于雙向嗎，我怎么感覺這溶液里面的鹽離子濃度太高了，到時(shí)會(huì)影響雙向嗎

沒關(guān)系啊我雙向電泳質(zhì)譜檢測(cè) 都是用的這個(gè)做的啊沒發(fā)現(xiàn)有影響小妹妹先做了再說吧有很多參考文獻(xiàn)你也可以參考

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7樓2011-09-23 21:30:03

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恩，謝謝

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8樓2011-09-24 09:23:50

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引用回帖:

二、水稻蛋白提取
樣品處理：水稻根部及葉片部分
磨樣：液氮保護(hù)下磨至細(xì)粉，分裝至各離 ...

你給出的方法估計(jì)我也會(huì)用到，先謝啦！我想問一下，有沒有相關(guān)這些試劑的作用，像PVPP之類的，相關(guān)文獻(xiàn)可以分享一下嗎，十分感謝哈！呵呵

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9樓2011-12-21 17:00:39

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引用回帖:

9樓: Originally posted by 小蝦啄米 at 2011-12-21 17:00:39:
你給出的方法估計(jì)我也會(huì)用到，先謝啦！我想問一下，有沒有相關(guān)這些試劑的作用，像PVPP之類的，相關(guān)文獻(xiàn)可以分享一下嗎，十分感謝哈！呵呵

這都什么時(shí)候給你的回復(fù)啊?好幾個(gè)月了吧忘了給了你我的壓箱子的實(shí)驗(yàn)步驟居然沒得居然現(xiàn)在才回復(fù)

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10樓2011-12-21 19:30:40

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