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追夢(mèng)的人1987金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
蛋白提取
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| 大家誰(shuí)用Tris-飽和酚提過(guò)蛋白啊，有沒(méi)有具體的操作步驟 啊，我看文獻(xiàn)上的說(shuō)法不一，大家一般都怎么操作啊， |
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4樓2011-09-22 11:01:47
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2樓2011-09-21 19:42:39
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3樓2011-09-22 08:57:52
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【答案】應(yīng)助回帖
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silicare(金幣+10, BioEPI+1): 2011-09-23 17:50:13
silicare(金幣+10, BioEPI+1): 2011-09-23 17:50:13
對(duì)了 你是要 中文版還是因?yàn)榘姹景。?算了，估計(jì)你還是 小妹妹， 還是給你發(fā)中文版吧，個(gè)人試驗(yàn)，若有誤差，不怪我 二、 水稻蛋白提取 樣品處理：水稻根部及葉片部分 磨樣：液氮保護(hù)下磨至細(xì)粉，分裝至各離心管中，約2g； 蛋白提�。罕椒臃� 1、取分裝好的樣品約2.0g，加入EB1 6ml，PVPP 0.02g，PMSF 60ul，β-巰基乙醇120ul，Na3VO4、NaF 各6 ul； 注： EB1: 0.7 M蔗糖、0.1 M的氯化鉀、0.5 M Tris鹽酸、10 mM EDTA，pH 7.5， 1%聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），即(樣品量的2%)2.0*1%=0.02g; 1mM PMSF：用異丙醇配制成100mM 母液貯存于冰箱中錫箔紙待用，每次用完即扔掉，用時(shí)根據(jù)EB1的總體積進(jìn)行稀釋，如本例中為6ml，則取母液60ul 加入到離心管中，則濃度為60*100/6000=1mM 2 %的β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol）（v/v）：如本例中EB1 為6ml，則6*2%=120ul 0.2mM Na3VO4：配成0.2mmol/ml 母液，用時(shí)稀釋即可，稱取Na3VO4 0.03678g溶于1ml水，此時(shí)母液濃度為0.2 mmol/ml，如本例中EB1 為6ml，則需取6ul，6*0.2/6=0.2 mM 1 mM NaF：配成1mmol/ml 母液，用時(shí)稀釋即可，稱取NaF 0.042g溶于1ml水，此時(shí)母液濃度為1mmol/ml，如本例中EB1 為6ml，則需取6ul，6*1/6=1mM 2、低溫斡旋10min（用冰盒保持溫度在較低溫度） 3、取出，加入水飽和苯酚6ml，同步驟2，低溫斡旋10min， 4、用EB1 配平各管，在T=4℃，10000g 條件下離心40min； 5、將上層酚相吸出至另管中，加入5倍體積醋酸銨飽和甲醇溶液，置于-20℃冰箱過(guò)夜沉淀， 6、次日取出，配平后同樣條件下離心40min，棄掉上清液，用冷丙酮清洗三遍，前兩遍離心10min，后一遍離心20min，用氮?dú)獯蹈纱?br /> 這是我試驗(yàn)本上的 一個(gè)字一個(gè)字幫你打印出來(lái)了 |
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5樓2011-09-22 11:05:36
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