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jj_ocean銅蟲(chóng) (初入文壇)
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QPCR 陰性對(duì)照沒(méi)有加模板 為什么還有溶解曲線峰 已有1人參與
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| QPCR 陰性對(duì)照沒(méi)有加模板cDNA,用水代替， 為什么還有溶解曲線峰?有加引物，并且陰性溶解曲線的峰和相應(yīng)的加有模板的峰的溫度是一致的！ |
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xiaoche
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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3樓2011-10-26 21:57:26
tcguobing
銀蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2011-10-25 14:43:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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1.你的引物不好，會(huì)形成二聚體，同時(shí)TM一致極可能說(shuō)明二聚體和你的產(chǎn)物一樣，也就是引物特異性不高，沒(méi)有特異性產(chǎn)物。 2.可能引物被cDNA污染，這個(gè)有個(gè)簡(jiǎn)單的排除辦法，你做3個(gè)加入不同濃度cDNA。最后CT值應(yīng)該會(huì)依次降低，或升高。如果出現(xiàn)這個(gè)趨勢(shì)，說(shuō)明PCR產(chǎn)物是從模板P出來(lái)的，引物被污染。同理，如果沒(méi)出現(xiàn)趨勢(shì)，則說(shuō)明是引物二聚體。 |
4樓2011-10-27 09:46:22
qlj0125
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2012-03-13 14:59:32
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