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zdx0木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
自噬檢測(cè)方面的問(wèn)題
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大家好！我剛剛開(kāi)始自噬方面的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)教大家： 我用不同濃度的藥物，定性和定量檢測(cè)24h時(shí)-Hela細(xì)胞自噬發(fā)生情況。根據(jù)文獻(xiàn)的查閱情況，開(kāi)始應(yīng)用MDC染色在熒光顯微鏡下觀察；另一方面用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)MDC陽(yáng)性比例。問(wèn)題是： 1、最初兩次熒光顯微鏡下檢測(cè)，和對(duì)照組相比，給藥組的熒光現(xiàn)象更明顯，可是最近做總是看到一片淡綠色，看不到每個(gè)細(xì)胞的輪廓及熒光情況？ 2、流式檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性Rapamycin對(duì)照總是不好，有時(shí)甚至和陰性圖形類似？ 我的懷疑是: 1、MDC染色方法操作處理中的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)一些文獻(xiàn)使用的方法不一，吖啶橙染的也不少。MDC有的用爬片，有的沒(méi)用，具體寫的不夠詳細(xì)。我沒(méi)有使用爬片，給藥24h后，PBS清洗，用MDC六孔板內(nèi)染色孵育15min后直接進(jìn)行的熒光鏡檢。因?yàn)榍皟纱斡斜容^明顯的圖，這樣操作過(guò)程簡(jiǎn)單，覺(jué)得可以�？墒�，最近卻觀察不到了，而且流式的結(jié)果圖，陽(yáng)性總是不明顯。 2、試劑。我按照文獻(xiàn)和說(shuō)明書(shū)處理的MDC和Rapamycin，終濃度0.05mmol/L和1umol/L，試劑使用前一天配置。 3、儀器。 4、操作。流式上機(jī)之前，MDC孵育后處理就是清洗，消化，離心（2次），重懸，上機(jī)。 開(kāi)始覺(jué)得挺簡(jiǎn)單的，熒光檢測(cè)比較明顯，就做了流式看看，但陽(yáng)性參照卻不明顯，很納悶。大家覺(jué)得是怎么回事，有什么建議么？ |
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樓主，您好，能不能夠發(fā)一下MDC使用的參考文獻(xiàn)給我，我想知道一下MDC怎么配制及使用。8樓2012-09-06 14:45:57
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