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zdx0木蟲(chóng) (小有名氣)
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自噬檢測(cè)方面的問(wèn)題
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大家好!我剛剛開(kāi)始自噬方面的實(shí)驗(yàn),請(qǐng)教大家: 我用不同濃度的藥物,定性和定量檢測(cè)24h時(shí)-Hela細(xì)胞自噬發(fā)生情況。根據(jù)文獻(xiàn)的查閱情況,開(kāi)始應(yīng)用MDC染色在熒光顯微鏡下觀察;另一方面用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)MDC陽(yáng)性比例。問(wèn)題是: 1、最初兩次熒光顯微鏡下檢測(cè),和對(duì)照組相比,給藥組的熒光現(xiàn)象更明顯,可是最近做總是看到一片淡綠色,看不到每個(gè)細(xì)胞的輪廓及熒光情況? 2、流式檢測(cè)時(shí),陽(yáng)性Rapamycin對(duì)照總是不好,有時(shí)甚至和陰性圖形類似? 我的懷疑是: 1、MDC染色方法操作處理中的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)一些文獻(xiàn)使用的方法不一,吖啶橙染的也不少。MDC有的用爬片,有的沒(méi)用,具體寫(xiě)的不夠詳細(xì)。我沒(méi)有使用爬片,給藥24h后,PBS清洗,用MDC六孔板內(nèi)染色孵育15min后直接進(jìn)行的熒光鏡檢。因?yàn)榍皟纱斡斜容^明顯的圖,這樣操作過(guò)程簡(jiǎn)單,覺(jué)得可以?墒,最近卻觀察不到了,而且流式的結(jié)果圖,陽(yáng)性總是不明顯。 2、試劑。我按照文獻(xiàn)和說(shuō)明書(shū)處理的MDC和Rapamycin,終濃度0.05mmol/L和1umol/L,試劑使用前一天配置。 3、儀器。 4、操作。流式上機(jī)之前,MDC孵育后處理就是清洗,消化,離心(2次),重懸,上機(jī)。 開(kāi)始覺(jué)得挺簡(jiǎn)單的,熒光檢測(cè)比較明顯,就做了流式看看,但陽(yáng)性參照卻不明顯,很納悶。大家覺(jué)得是怎么回事,有什么建議么? |

木蟲(chóng) (小有名氣)

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鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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