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[交流] 求助：純化蛋白遇到包涵體了，尿素怎么用？

純化大腸桿菌重組蛋白，遇到包涵體了，超聲裂解不能澄清，離心后蛋白全在菌體沉淀里面

低溫誘導(dǎo)貌似沒(méi)什么效果。。。。。。請(qǐng)問(wèn)大家用什么方法釋放出來(lái)包涵體呢？

有人用8M尿素處理超聲成功破裂包涵體

我的問(wèn)題是，8M的尿素怎么去掉呢？我們的蛋白是GST標(biāo)簽的，是打算用GST瓊脂糖柱子純化的。。。。我不知道8M的尿素對(duì)柱子有沒(méi)有什么影響呢？

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1樓 2011-10-04 13:12:26

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amisking(金幣+4): 鼓勵(lì)應(yīng)助。 2011-10-04 18:51:31

復(fù)性緩沖液的濃度分別為：4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。

復(fù)性緩沖液：PBS 1mmol/LEDTA +尿素

抱歉這個(gè)濃度沒(méi)看懂呢，是指的尿素的濃度嗎？

聽(tīng)說(shuō)尿素處理后GST標(biāo)簽蛋白的結(jié)構(gòu)被破壞得很嚴(yán)重，復(fù)性效果也不好，不知道是不是真的？

復(fù)性就指去除尿素，然后蛋白質(zhì)自己折疊？導(dǎo)師說(shuō)我們這個(gè)蛋白就是個(gè)直的，不需要折疊，那么主要就要復(fù)性GST了

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4樓2011-10-04 13:30:32

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5樓: Originally posted by 18853850850 at 2011-10-04 15:09:14:
上面的濃度是尿素的濃度，去除尿素之后蛋白就會(huì)按照最穩(wěn)定的形態(tài)去折疊，主要是而二硫鍵的作用，GST標(biāo)簽很大，你的蛋白是直的，也有天然構(gòu)象，要去除尿素。謝謝你有金幣。

復(fù)性的過(guò)程太費(fèi)時(shí)間了

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6樓2011-10-04 22:43:30

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7樓: Originally posted by 18853850850 at 2011-10-05 09:11:47:
可是你不用管，過(guò)段時(shí)間換液就行了

我試試不復(fù)性直接掛柱子看能不能行。。。我用的3M尿素試試哎

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8樓2011-10-05 13:28:34

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9樓: Originally posted by youngker918 at 2011-10-05 20:10:50:
你可以先透析去除尿素再過(guò)柱子的

恩啊也許只能這樣干了。。。。。。。。。

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10樓2011-10-05 23:45:35

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4545822樓: Originally posted by rhguo at 2012-04-27 17:17:53:
低溫誘導(dǎo)可溶性表達(dá)的確不靠譜，我都到24度了，包涵體里面的還是非常濃，上清非常少

24度真的不算低。。。我最終15度。。。出來(lái)了很多

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12樓2012-04-27 19:11:10

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4546852樓: Originally posted by rhguo at 2012-04-28 13:09:07:
15度，這也太夸張了吧，這么低溫度，誘導(dǎo)時(shí)間呢？

誘導(dǎo)14小時(shí)

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16樓2012-05-12 21:34:00

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