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1289622木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助血液樣品處理問(wèn)題
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初次接觸血樣處理的實(shí)驗(yàn)有許多問(wèn)題不是很明白: 1、分離血漿時(shí)采集的血液要立即離心，還是靜置一會(huì)再離心？有時(shí)候采樣點(diǎn)不能一次性完成不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)吧？2、離心獲得的血漿要立即放入冰箱中嗎？由于采樣的時(shí)間跨度在7個(gè)小時(shí)，這樣之前分離的血漿要在室溫條件下至少放置7個(gè)小時(shí)（實(shí)驗(yàn)的地方?jīng)]有冰箱），這樣可行嗎？ 3、怎樣防止溶血現(xiàn)象?離心獲得的血漿都是紅色的，抽血時(shí)壓力不是很大，將血液推入離心管時(shí)動(dòng)作也很緩和（針頭已經(jīng)拔掉），為什么還有溶血現(xiàn)象？ 4、-20℃保存的血漿可以保存多久?血漿怎樣復(fù)溶？是放在室溫下自然融化，還是要在一定的水浴溫度下融化？ 5、取空白血漿之前也要禁食嗎？為什么？禁食多久？ 6、血漿和血清樣品必須要進(jìn)行蛋白沉淀嗎？有的說(shuō)液液萃取不必進(jìn)行蛋白沉淀，這種說(shuō)法正確嗎？ 7、乙酸乙酯處理血漿，除能提取藥物外還能融入血漿中的什么成分？用它提取藥物，氮?dú)獯蹈珊笤購(gòu)?fù)溶發(fā)現(xiàn)離心管底部有些東西溶解不了，復(fù)溶的液體有塊狀漂浮物，這種情況該怎么辦？會(huì)不會(huì)影響藥物的復(fù)溶效果？ 8、分離血漿用的肝素鈉濃度一般是多大的？肝素鈉中的水分對(duì)血漿樣品有影響嗎，什么影響？粉末狀的肝素鈉怎么配成溶液？ 9、走液相時(shí)，樣品的色譜峰不是較光滑的線條而是波浪形的線條，這是怎么回事？是柱子的問(wèn)題嗎，怎樣解決？ 10、冰凍的血漿樣品復(fù)溶后血漿里面有一些絮狀或是膠狀粘稠物質(zhì)，請(qǐng)問(wèn)這是什么物質(zhì)？取血漿的時(shí)候沒(méi)有取到那些粘稠物質(zhì)，這會(huì)影響血漿藥物含量的測(cè)定嗎？ [ Last edited by 1289622 on 2011-10-22 at 09:32 ] |
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4樓2011-11-06 14:58:28
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【答案】應(yīng)助回帖
1289622(金幣+10, 博學(xué)EPI+1): 2011-12-06 12:38:15
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好多。。。偶來(lái)一個(gè)個(gè)說(shuō)說(shuō)個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)吧 1 最好是采集后盡快離心，不過(guò)我加了抗凝劑 感覺(jué)過(guò)了十幾分鐘一批樣品全部出來(lái)再離心 也能很好的分離，個(gè)人覺(jué)得加了抗凝后只要注意不要大幅度晃動(dòng)導(dǎo)致凝血就行。 2 當(dāng)然是盡快放入冰箱的 如果實(shí)驗(yàn)室么有 就用個(gè)泡沫盒子 里面放個(gè)冰袋就行啊 低溫總是好的 能做到的就盡量做到嘛 雖然我有時(shí)候也來(lái)不及放冰箱 但也是盡快放入 3 我每次都是加了抗凝以后 全血在ep管里上下輕微顛倒下 都木有溶血 這個(gè)完全看你操作了吧 包括放入離心機(jī)前也不要大幅度晃動(dòng) 4 -20℃感覺(jué)可以挺久的 我最長(zhǎng)一次保存了2-3個(gè)月 仍然測(cè)定出來(lái)了 用的是自然解凍的 5 最好禁食 因?yàn)橐皇呛蛯?shí)驗(yàn)組平行 實(shí)驗(yàn)組禁食的啊 2是防止食物中的個(gè)別成分影響 但覺(jué)得影響可以忽略 禁食一般實(shí)驗(yàn)組是12-14個(gè)小時(shí)吧 自由飲水 6 當(dāng)然要沉淀蛋白啊 不然會(huì)對(duì)柱子很大損傷 加沉淀劑沉淀蛋白 和液液萃取 都是除去蛋白的過(guò)程 因?yàn)檩腿〉倪^(guò)程中 蛋白萃取不出來(lái) 所以這兩個(gè)選擇一個(gè)效率高的就行 7 還能融入神馬東西 這個(gè)偶還沒(méi)考慮過(guò) 但是肯定有一些雜質(zhì)在其中的，還有一些親脂的東東，吹干后復(fù)溶時(shí)加入溶劑后，充分渦旋混勻 然后離心取上清 就可以把雜質(zhì)除去 復(fù)溶后有雜質(zhì)很正常的 所以都要離心取上清 不用擔(dān)心 8 肝素鈉我們一般都是直接用毛細(xì)管挑一點(diǎn)放入子彈頭 然后彈開 感覺(jué)效果不錯(cuò) 因?yàn)榕淞巳芤哼�要吹干 感覺(jué)很麻煩 配成溶液后抗凝好像是1:50-100 濃度我等會(huì)查查其他帖子 很多人都寫過(guò) 9 你的不光滑是指神馬不光滑？基線還是？ 是基線平穩(wěn)但是出峰不光滑？這個(gè)原因比較多 你詳細(xì)說(shuō)下 而且是ms還是液相 10血漿中的一些纖維蛋白 可能還有其他蛋白成分 你把它挑開放在一邊 吸取液體的血漿 感覺(jué)影響不大 藥物分散在液體血漿中的 不過(guò)沒(méi)有影響也是不可能的 大家都有 也就平行了？呵呵 有什么情況在交流討論吧 |
2樓2011-10-29 15:58:38
1289622
木蟲 (正式寫手)
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3樓2011-11-05 21:25:27
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5樓2011-11-06 18:32:18
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