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1289622木蟲 (正式寫手)
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[求助]
求助血液樣品處理問題
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初次接觸血樣處理的實驗有許多問題不是很明白: 1、分離血漿時采集的血液要立即離心，還是靜置一會再離心？有時候采樣點不能一次性完成不會影響實驗吧？2、離心獲得的血漿要立即放入冰箱中嗎？由于采樣的時間跨度在7個小時，這樣之前分離的血漿要在室溫條件下至少放置7個小時（實驗的地方沒有冰箱），這樣可行嗎？ 3、怎樣防止溶血現(xiàn)象?離心獲得的血漿都是紅色的，抽血時壓力不是很大，將血液推入離心管時動作也很緩和（針頭已經拔掉），為什么還有溶血現(xiàn)象？ 4、-20℃保存的血漿可以保存多久?血漿怎樣復溶？是放在室溫下自然融化，還是要在一定的水浴溫度下融化？ 5、取空白血漿之前也要禁食嗎？為什么？禁食多久？ 6、血漿和血清樣品必須要進行蛋白沉淀嗎？有的說液液萃取不必進行蛋白沉淀，這種說法正確嗎？ 7、乙酸乙酯處理血漿，除能提取藥物外還能融入血漿中的什么成分？用它提取藥物，氮氣吹干后再復溶發(fā)現(xiàn)離心管底部有些東西溶解不了，復溶的液體有塊狀漂浮物，這種情況該怎么辦？會不會影響藥物的復溶效果？ 8、分離血漿用的肝素鈉濃度一般是多大的？肝素鈉中的水分對血漿樣品有影響嗎，什么影響？粉末狀的肝素鈉怎么配成溶液？ 9、走液相時，樣品的色譜峰不是較光滑的線條而是波浪形的線條，這是怎么回事？是柱子的問題嗎，怎樣解決？ 10、冰凍的血漿樣品復溶后血漿里面有一些絮狀或是膠狀粘稠物質，請問這是什么物質？取血漿的時候沒有取到那些粘稠物質，這會影響血漿藥物含量的測定嗎？ [ Last edited by 1289622 on 2011-10-22 at 09:32 ] |
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【答案】應助回帖
1289622(金幣+10, 博學EPI+1): 2011-12-06 12:38:15
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好多。。。偶來一個個說說個人的經驗吧 1 最好是采集后盡快離心，不過我加了抗凝劑 感覺過了十幾分鐘一批樣品全部出來再離心 也能很好的分離，個人覺得加了抗凝后只要注意不要大幅度晃動導致凝血就行。 2 當然是盡快放入冰箱的 如果實驗室么有 就用個泡沫盒子 里面放個冰袋就行啊 低溫總是好的 能做到的就盡量做到嘛 雖然我有時候也來不及放冰箱 但也是盡快放入 3 我每次都是加了抗凝以后 全血在ep管里上下輕微顛倒下 都木有溶血 這個完全看你操作了吧 包括放入離心機前也不要大幅度晃動 4 -20℃感覺可以挺久的 我最長一次保存了2-3個月 仍然測定出來了 用的是自然解凍的 5 最好禁食 因為一是和實驗組平行 實驗組禁食的啊 2是防止食物中的個別成分影響 但覺得影響可以忽略 禁食一般實驗組是12-14個小時吧 自由飲水 6 當然要沉淀蛋白啊 不然會對柱子很大損傷 加沉淀劑沉淀蛋白 和液液萃取 都是除去蛋白的過程 因為萃取的過程中 蛋白萃取不出來 所以這兩個選擇一個效率高的就行 7 還能融入神馬東西 這個偶還沒考慮過 但是肯定有一些雜質在其中的，還有一些親脂的東東，吹干后復溶時加入溶劑后，充分渦旋混勻 然后離心取上清 就可以把雜質除去 復溶后有雜質很正常的 所以都要離心取上清 不用擔心 8 肝素鈉我們一般都是直接用毛細管挑一點放入子彈頭 然后彈開 感覺效果不錯 因為配了溶液還要吹干 感覺很麻煩 配成溶液后抗凝好像是1:50-100 濃度我等會查查其他帖子 很多人都寫過 9 你的不光滑是指神馬不光滑？基線還是？ 是基線平穩(wěn)但是出峰不光滑？這個原因比較多 你詳細說下 而且是ms還是液相 10血漿中的一些纖維蛋白 可能還有其他蛋白成分 你把它挑開放在一邊 吸取液體的血漿 感覺影響不大 藥物分散在液體血漿中的 不過沒有影響也是不可能的 大家都有 也就平行了？呵呵 有什么情況在交流討論吧 |
2樓2011-10-29 15:58:38
1289622
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3樓2011-11-05 21:25:27
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4樓2011-11-06 14:58:28
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5樓2011-11-06 18:32:18
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6樓2011-11-09 08:57:53
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7樓2011-11-09 09:01:50
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8樓2011-11-11 11:33:22
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【答案】應助回帖
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我全回答不了，后面的那幾個不是我的方向，說一些我知道的給你， 采血溶血問題：我是不用注射器采的，因為它有時候溶血，我也解釋不了為什么，猜測還是抽和打得時候的力度不好掌握，建議用真空管，和一次性的采血針，真的很好用，。。。。。。。。。。。。離心： 有么馬上離心，要么等2,3個小時在離，等凝固了，表面有析出了在離，效果還是很不錯的，。。。。。。血漿放7個小時要看你測什么指標了，研究研究你要測的指標的性質吧。。。。。。。。-20度 印象里好像3個月左右沒什么問題吧，知網上可以找到這方面的不同溫度保存的文章，以前看過現(xiàn)在忘了。。。。。其它的幫不上了。。。。呵呵呵生活開心，神棍節(jié)快樂。 |
9樓2011-11-11 14:19:23
愛拼才會贏
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