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HarveyWang捐助貴賓 (知名作家)
海外行者
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[交流]
微生物學(xué)到這個(gè)份上，讓我無(wú)言~~~ 已有29人參與
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【你好！想向你請(qǐng)教一個(gè)問(wèn)題，可否？】 -----------Go on, Pleas. 【你好，這是我發(fā)的一個(gè)求助帖，至今沒(méi)有回復(fù)�。≌娌缓靡馑�，沒(méi)養(yǎng)成登陸小木蟲(chóng)的習(xí)慣，能否麻煩看一下我的問(wèn)題是怎么一回[求助]金黃色葡萄球菌退化原因？？ 各位蟲(chóng)友好，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌挛椰F(xiàn)在遇到的問(wèn)題，著急啊，研三了影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)度啊！實(shí)驗(yàn)為抗菌活性的檢測(cè)，檢測(cè)樣品是否抑制金黃色葡萄球菌,簡(jiǎn)稱SA，菌株SA出現(xiàn)問(wèn)題也不是第一次了，菌株是從學(xué)院的微生物實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)接了兩支斜面過(guò)來(lái)，起先活性還不錯(cuò)，（自己認(rèn)為的）牛肉膏蛋白胨1天半可以長(zhǎng)滿平板的，但后來(lái)不知道什么原因，菌株不僅在平板上長(zhǎng)得慢，而且密度也不如從前，最后 直接就不長(zhǎng)了。自己分析原因，菌株退化，培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件，覺(jué)得很有可能是菌株退化，又從那個(gè)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)接過(guò)來(lái)兩支斜面，經(jīng)過(guò)傳代3次活化后，我就將SA配制成一定濃度的菌懸液，裝于15%的甘油保存管中，保存于4攝氏度下。起先SA活性挺好的，1天就可以長(zhǎng)滿平板，持續(xù)了1個(gè)半月，但好景不長(zhǎng)菌株又不行了，連續(xù)做了三次，三批平板的SA都不長(zhǎng),根本出不來(lái)檢測(cè)結(jié)果，這次已經(jīng)培養(yǎng)了40個(gè)h，只看見(jiàn)平板上零星長(zhǎng)出來(lái)幾個(gè)單菌落，指示菌問(wèn)題不解決，實(shí)驗(yàn)就沒(méi)法進(jìn)行啊! 請(qǐng)各位幫忙分析一下原因吧，如果是菌株退化，也就2個(gè)月時(shí)間，怎么這么容易退化呢？以前是直接斜面保存，后來(lái)通過(guò)跟其他實(shí)驗(yàn)室交流，改用了甘油低溫保存方法�！� ----------------是你的菌株保存方法出了問(wèn)題�。�！ 用20-25%的甘油保存新鮮的細(xì)菌培養(yǎng)液，是在零下20至 一80℃，一年根本不會(huì)出問(wèn)題。 誰(shuí)告訴你在4℃保存的？�。�！ 你學(xué)微生物的，怎么這么基本的知識(shí)都不了解？ ----------------配制500g/L的甘油母液，121攝氏度滅菌20-30min。 取OD 1-5 的細(xì)菌新鮮培養(yǎng)液 100 uL加入到 含有100 uL的 500g/L的甘油母液中。 用滅菌的1.5mL的EP管保存。 一次保存10-20管，每次拿出一支來(lái)涂平板培養(yǎng)新鮮的菌落。零下20度，最好零下80度保存。 兩年基本沒(méi)問(wèn)題。 你。。。你。。。。讓我說(shuō)你什么呢？你都研三了，這樣的事情還搞不定？！ 【500g/L的甘油母液，甘油不是液體的嗎？什么叫母液呢，請(qǐng)問(wèn)可否告知你這個(gè)方法的參考來(lái)源呢？ 恕我還想向你請(qǐng)教，真的想學(xué)習(xí)，OD值和細(xì)菌數(shù)目如何建立關(guān)系呢？如果OD值為1，那么細(xì)菌的數(shù)目為多少呢？因?yàn)榭戳宋墨I(xiàn)的描述是細(xì)菌數(shù)目為多少cfu/mL。 我們實(shí)驗(yàn)室就是這樣做的，并沒(méi)有太在意溫度是4攝氏度會(huì)有如此大的影響，我知道低溫是保存菌種的一個(gè)因素，但為什么要這么低的溫度呢，4攝氏度為何就會(huì)不行呢，至少可以保證幾個(gè)月吧？】 -----------我所說(shuō)的是一個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)室 最基本的知識(shí)。 一開(kāi)始你這樣問(wèn)，我還以為你是誠(chéng)心氣我的。 所以我還懷疑你根本不是微生物專業(yè)的。 甘油母液即 Glycerol stock solution. Glycerol stock solution (500g/L)： 40 ml 甘油用雙蒸水定容成100 mL（也即40% v/v甘油溶液）。專門(mén)用來(lái)儲(chǔ)存細(xì)菌或霉菌孢子的。。。因?yàn)閷脮r(shí)按1:1體積加入，就成了最終甘油20%的含量。這個(gè)濃度可以使細(xì)菌在低溫下儲(chǔ)存很久而不會(huì)死掉。 OD和CFU/mL需要你用自己的細(xì)菌做稀釋平板，計(jì)算得出。 我告訴你的數(shù)值不適合你的細(xì)菌。 用甘油保存菌株，什么溫度最好，這是微生物專業(yè)的研一學(xué)生就應(yīng)該了解的知識(shí)。 你再不懂，也應(yīng)該知道有數(shù)據(jù)庫(kù)或google可以查。 |
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18樓2011-12-16 11:31:57
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可能不是學(xué)微生物的吧。。。 2樓2011-10-11 08:15:36
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3樓2011-10-11 08:37:17
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4樓2011-10-11 09:53:50
5樓2011-10-11 09:57:39
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6樓2011-10-11 11:08:13
HarveyWang
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7樓2011-10-11 11:26:19
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)積極回帖交流^_^ 2011-10-16 10:48:46
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)積極回帖交流^_^ 2011-10-16 10:48:46
| 首先我們要感謝HarveyWang 提出了這個(gè)問(wèn)題，誰(shuí)都有陰溝里翻船的時(shí)候，也許HarveyWang 平時(shí)過(guò)于專注自己的實(shí)驗(yàn)，我們講究做科研時(shí)眼觀六路、耳聽(tīng)八方，不斷的留意實(shí)驗(yàn)室里其他人在干什么，遇到什么問(wèn)題，咋解決的，這樣的積累，會(huì)很有幫助。另外要對(duì)其導(dǎo)師提出意見(jiàn)，他或她沒(méi)有很好的關(guān)注HarveyWang的競(jìng)技狀態(tài)。最后我們預(yù)祝HarveyWang進(jìn)展順利。 |
8樓2011-10-13 21:37:26
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9樓2011-10-13 22:50:12
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zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)積極回帖交流^_^ 2011-10-16 10:48:56
| 嗨，除了保存里面還有個(gè)問(wèn)題，里面有個(gè)更嚴(yán)重的結(jié)果你要注意，你的抑菌實(shí)驗(yàn)有對(duì)照嗎。如果你的細(xì)菌根本接不活，在對(duì)照（無(wú)藥物）平板上就不長(zhǎng)的話，你就不該往下做實(shí)驗(yàn)，還談什么實(shí)驗(yàn)結(jié)果。我現(xiàn)在懷疑你從保藏管中接出來(lái)時(shí)有沒(méi)有活化幾次。直接就做實(shí)驗(yàn)嗎？實(shí)際上你在4度保存一個(gè)月的話，細(xì)菌也不至于全部死完。哎呀，實(shí)驗(yàn)多用心啊!小鬼 |
10樓2011-10-14 11:02:00
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