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關(guān)于SDS-PAGE電泳問(wèn)題
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最近跑SDS_PAGE總是出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，在濃縮膠時(shí)跑的挺正常的，但到分離膠后溴酚藍(lán)條帶便變的非常寬，考馬斯亮藍(lán)熱色脫色后見(jiàn)圖片，請(qǐng)各位高手幫忙分析一下原因。 電泳條件是：電壓濃縮膠80V，分離膠160V；甘氨酸緩沖液為5倍母液稀釋；制膠的30%的丙烯酰胺及TEMED為10個(gè)月前購(gòu)買的伯樂(lè)產(chǎn)品，濃縮膠1M Tris pH 6.8，分離膠1.5M Tris pH 8.8，10% 過(guò)硫酸銨等其他溶液均為新配制，所用電泳儀為伯樂(lè)迷你電泳儀。 第一幅圖的前兩個(gè)泳道為菌體加熱處理后的樣品 |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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lstt09nk(金幣+2): 感謝參與 2011-10-11 14:42:51
zyx335588(金幣+5): 2011-10-15 15:32:56
lstt09nk(金幣+2): 感謝參與 2011-10-11 14:42:51
zyx335588(金幣+5): 2011-10-15 15:32:56
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1.那前兩個(gè)樣品上樣量太大 2.分離膠不要用太大電流，用120就行，越大，你的樣品制的不好的話，或者是膠本身有問(wèn)題的話，就越容易拖尾。 3.最有可能的是膠的問(wèn)題了，具體是哪一部分就得你自己實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證了，我以前也遇到過(guò)這種問(wèn)題，換了別人配的試劑就沒(méi)事了，別外丙烯酰胺不能放過(guò)久，祝你好運(yùn)！ |
2樓2011-10-11 12:31:53
7樓2011-11-28 14:45:56
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