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doudouxiong銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
真菌基因組DAN提取圖片，求高人指點
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這是我提取的真菌基因組的DNA，因為材料量比較少的問題，因此采用液氮研磨，然后再用CTAB研磨，后用氯仿異戊醇抽提兩次，然后用酒精洗，結(jié)果每次檢測的圖片都是這樣，請問這是DNA降解還是蛋白質(zhì)污染，如果是DNA降解，那么是我研磨的時候降解的嗎？可能有那種情況就是研磨的時候把DNA研磨斷了或者是破了導(dǎo)致的降解這一說法嗎？ |
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西瓜(金幣+4): Good！ 2011-10-19 18:36:31
西瓜(金幣+4): Good！ 2011-10-19 18:36:31
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我也來說說。 1.你的電泳圖，MARker條帶跑的很漂亮，可以排除電泳條件方面的原因。 2.點樣孔發(fā)亮的原因是有機(jī)物和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，這個不是關(guān)鍵問題。 3.樣品DNA條帶彌散，幾乎布滿整個泳道，說明DNA嚴(yán)重降解，這才是問題關(guān)鍵。 個人愚見。所有實驗用品滅菌，除去核酸酶，操作過程中在冰上進(jìn)行，操作過程盡量輕柔。 你提取DNA的方法我沒用過，僅僅根據(jù)我自己用的方法及應(yīng)驗給你提的建議，僅供參考！ |
12樓2011-10-19 09:54:07
doudouxiong
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送鮮花一朵 9樓2011-10-18 23:56:39
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amisking(金幣+3): 鼓勵應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-16 21:27:32
doudouxiong(金幣+3): 我做的是銹菌的夏孢子，孢子壁相當(dāng)厚，很難磨破的，哎，悲劇的 2011-10-18 23:55:25
amisking(金幣+3): 鼓勵應(yīng)助發(fā)帖！ 2011-10-16 21:27:32
doudouxiong(金幣+3): 我做的是銹菌的夏孢子，孢子壁相當(dāng)厚，很難磨破的，哎，悲劇的 2011-10-18 23:55:25
| 蛋白污染的可能性大一些，因為點樣孔那都有污染的情況發(fā)生。一般來說液氮研磨時應(yīng)該不會將DNA破壞。試一下別的方法�！�6種鏈霉菌基因組DNA提取方法比較》這篇文獻(xiàn)里面講了幾種方法，可以試一下，我以前也是做的鏈霉菌的，沒做過真菌的，但它們的相似度還是挺高的。 |
2樓2011-10-16 18:27:00
3樓2011-10-17 01:50:17
怎么都行
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4樓2011-10-17 02:11:30
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5樓2011-10-17 08:28:09
honjie
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wanhscn(金幣+2): 鼓勵交流 2011-10-17 18:49:14
wanhscn(金幣+2): 鼓勵交流 2011-10-17 18:49:14
| 加蛋白酶K60度處理1小時看看，看你的圖片有兩個泳道有堵孔現(xiàn)象，可能是蛋白，另外，DNA有講解的現(xiàn)象，建議用SDS破膜劑試試看，減少研磨次數(shù)和時間，量若不多，加SDS破膜后反復(fù)吹打即可，未必要研磨。 |
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6樓2011-10-17 10:12:50
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wanhscn(金幣+2): 鼓勵交流 2011-10-17 18:49:01
doudouxiong(金幣+5): 2011-10-18 23:54:18
wanhscn(金幣+2): 鼓勵交流 2011-10-17 18:49:01
doudouxiong(金幣+5): 2011-10-18 23:54:18
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2個原因：蛋白質(zhì)污染或者DNA降解 抽提時可以用酚：氯仿:異戊醇抽屜一下，防止蛋白質(zhì)污染。最后再用RNase處理。如果還是這樣的結(jié)果，那就是DNA降解了 |
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7樓2011-10-17 11:56:53
【答案】應(yīng)助回帖
★
西瓜(金幣+1): 鼓勵交流 2011-10-19 18:35:30
西瓜(金幣+1): 鼓勵交流 2011-10-19 18:35:30
| 我以前提過酵母基因組 用氯化芐法 你可以參考參考 |
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8樓2011-10-17 18:25:23
doudouxiong
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10樓2011-10-18 23:57:32
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