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葉片中的激素提取不出來(lái)
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Sample Text 我現(xiàn)在用下面的方法來(lái)提取草的葉片中的IAA，然后再用高效液相色譜測(cè)量，可是提取不出來(lái)，不知道有沒(méi)有人用過(guò)這種方法，希望能指點(diǎn)我一下，不勝感激；或者有更好的方法。謝謝 （1）取0.5g葉片，加液氮研磨至粉碎，然后加入8ml（0.05M，PH=7.0，含0.02%二乙基二硫帶氨基甲酸鈉）磷酸鈉緩沖液，繼續(xù)研磨至勻漿，倒入離心管中， （2） 在4。C條件下持續(xù)振蕩1~2h。 （3） 取出離心管，用1M鹽酸調(diào)PH約2.6 （4） 加入0.5g XAD-7離子交換樹(shù)脂，在4。C條件下振蕩半小時(shí)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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孫啟亮: 回帖置頂 2011-12-22 10:01:32
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孫啟亮: 回帖置頂 2011-12-22 10:01:32
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方法：80%甲醇低溫研磨勻漿，1 OOOr/min離心30min ,取上清液，通過(guò)C18柱以去除植物色素。初純化液用N2吹干、去除甲醇，加磷酸氫二鉀HB. 0)溶解后，用乙酸乙酷萃取，水相(pH調(diào)至2. 5 )再用乙醇乙酷萃取(DHZRs與iPAs用正丁醇提取;ABA還需進(jìn)行甲醋化)。N2吹干后加磷酸緩沖液溶解，用ELISA測(cè)定激素含量。 參見(jiàn)：周燮，植物激素IAA、GAs、CTKs與ABA的免疫檢測(cè)技術(shù)，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物生理教研室編，1992 |
6樓2011-10-22 12:26:12
kukoob
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2樓2011-10-20 13:45:13
3樓2011-10-20 13:54:56
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4樓2011-10-20 13:59:22
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Leaf tissue (20 mg) was ground with a mortar and a pestle in liquid N, and homogenized in 1.5 mL Na-phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) containing 0.02% (w/v) sodium diethyldithiocarbamate as an antioxidant. An internal standard of 13C6–IAA (200 ng) was added into each sample and extracted by continuous shaking for 1 h at 4°C. The samples were transferred into 1.5-mL microcentrifuge tubes after extraction and pH was adjusted to approximately 2.6 with 1.0 M HCl (about 43 μL of HCl was required for 1 mL of extract). The sample was slurried with 60 mg of Amberlite XAD-7 (Sigma, MO) for 30 min. After removal of the buff er, the XAD-7 was washed with 2 × 500 μL of 1% acetic acid before being slurried with 2 × 500 μL of dichloromethane for 2 × 30 min (Edlund et al., 1995). The combined dichloromethane fractions were reduced to dryness with nitrogen gas. Samples were methylated with ethereal diazomethane at room temperature according to Prinsen et al. (2000). 這是我們老師給我們的方法，他說(shuō)可以，但是我就是測(cè)不出來(lái)~~郁悶啊，你說(shuō)可能是咱們國(guó)產(chǎn)藥品配制的緩沖液不準(zhǔn)確的原因嗎？ |
5樓2011-10-20 14:12:39
qixs2011
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