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szslg

銀蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 葉片中的激素提取不出來(lái)

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我現(xiàn)在用下面的方法來(lái)提取草的葉片中的IAA，然后再用高效液相色譜測(cè)量，可是提取不出來(lái)，不知道有沒(méi)有人用過(guò)這種方法，希望能指點(diǎn)我一下，不勝感激；或者有更好的方法。謝謝
（1）取0.5g葉片，加液氮研磨至粉碎，然后加入8ml（0.05M，PH=7.0，含0.02%二乙基二硫帶氨基甲酸鈉）磷酸鈉緩沖液，繼續(xù)研磨至勻漿，倒入離心管中，

（2）在4。C條件下持續(xù)振蕩1~2h。

（3）取出離心管，用1M鹽酸調(diào)PH約2.6

（4）加入0.5g XAD-7離子交換樹(shù)脂，在4。C條件下振蕩半小時(shí)。

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1樓 2011-10-20 13:08:43

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王海鵬的

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
缺友情(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助交流！歡迎常來(lái)農(nóng)林版！ 2011-10-22 17:54:14
szslg(金幣+5): 2011-11-10 16:59:38
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孫啟亮: 回帖置頂 2011-12-22 10:01:32

方法：80%甲醇低溫研磨勻漿，1 OOOr/min離心30min ,取上清液，通過(guò)C18柱以去除植物色素。初純化液用N2吹干、去除甲醇，加磷酸氫二鉀HB. 0)溶解后，用乙酸乙酷萃取，水相(pH調(diào)至2. 5 )再用乙醇乙酷萃取(DHZRs與iPAs用正丁醇提取;ABA還需進(jìn)行甲醋化)。N2吹干后加磷酸緩沖液溶解，用ELISA測(cè)定激素含量。
參見(jiàn)：周燮，植物激素IAA、GAs、CTKs與ABA的免疫檢測(cè)技術(shù)，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)植物生理教研室編，1992

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抱元守一可得永年

6樓2011-10-22 12:26:12

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kukoob

鐵桿木蟲(chóng) (知名作家)

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【答案】應(yīng)助回帖

葉子太少了！
看你選定什么葉子了！

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不知不覺(jué)

2樓2011-10-20 13:45:13

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引用回帖:

2樓: Originally posted by kukoob at 2011-10-20 13:45:13:
葉子太少了！
看你選定什么葉子了！

我前兩天也試了試加1g的葉片還是不行。。。不知道是不是提取液的事？磷酸緩沖液能把葉片中的激素提取出來(lái)嗎？

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3樓2011-10-20 13:54:56

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kukoob

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缺友情(金幣+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助交流！歡迎常來(lái)農(nóng)林版！ 2011-10-22 17:54:30
szslg(金幣+5): 2011-11-10 16:59:28
缺友情: 回帖置頂 2011-12-22 10:47:43

磷酸緩沖液能把葉片中的激素提取出來(lái)嗎？
我也懷疑這個(gè)！
你換換其他的液體試試！
反正也花不了多少錢！
最好同時(shí)多做幾組不同的方案！

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不知不覺(jué)

4樓2011-10-20 13:59:22

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引用回帖:

4樓: Originally posted by kukoob at 2011-10-20 13:59:22:
磷酸緩沖液能把葉片中的激素提取出來(lái)嗎？
我也懷疑這個(gè)！
你換換其他的液體試試！
反正也花不了多少錢！
最好同時(shí)多做幾組不同的方案！

Leaf tissue (20 mg) was ground with a mortar and a pestle
in liquid N, and homogenized in 1.5 mL Na-phosphate buffer
(0.05 M, pH 7.0) containing 0.02% (w/v) sodium diethyldithiocarbamate
as an antioxidant. An internal standard of
13C6–IAA (200 ng) was added into each sample and extracted
by continuous shaking for 1 h at 4°C. The samples were
transferred into 1.5-mL microcentrifuge tubes after extraction
and pH was adjusted to approximately 2.6 with 1.0 M
HCl (about 43 μL of HCl was required for 1 mL of extract).
The sample was slurried with 60 mg of Amberlite XAD-7
(Sigma, MO) for 30 min. After removal of the buff er, the
XAD-7 was washed with 2 × 500 μL of 1% acetic acid before
being slurried with 2 × 500 μL of dichloromethane for 2 ×
30 min (Edlund et al., 1995). The combined dichloromethane
fractions were reduced to dryness with nitrogen gas. Samples
were methylated with ethereal diazomethane at room temperature
according to Prinsen et al. (2000).
這是我們老師給我們的方法，他說(shuō)可以，但是我就是測(cè)不出來(lái)~~郁悶啊，你說(shuō)可能是咱們國(guó)產(chǎn)藥品配制的緩沖液不準(zhǔn)確的原因嗎？

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5樓2011-10-20 14:12:39

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qixs2011

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樓上方法可靠。

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7樓2011-10-23 15:20:16

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hejun77

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szslg(金幣+5): 2011-11-10 16:59:47

看看流出液中有沒(méi)有你的目標(biāo)物，如果有，且含量較高，也可以收集洗脫液來(lái)達(dá)到富集的目的

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8樓2011-11-08 18:07:12

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農(nóng)科山莊

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szslg(金幣+5): 2011-11-10 16:59:51

引用回帖:

3樓: Originally posted by szslg at 2011-10-20 13:54:56:
我前兩天也試了試加1g的葉片還是不行。。。不知道是不是提取液的事？磷酸緩沖液能把葉片中的激素提取出來(lái)嗎？

要根據(jù)檢測(cè)限、提取率、葉片含量，確定葉片取樣量。必要時(shí)需考察方法的回收率，做加樣回收。

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9樓2011-11-08 20:17:17

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劉凌燕

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引用回帖:

9樓: Originally posted by 農(nóng)科山莊 at 2011-11-08 20:17:17:
要根據(jù)檢測(cè)限、提取率、葉片含量，確定葉片取樣量。必要時(shí)需考察方法的回收率，做加樣回收。

那請(qǐng)問(wèn)回收率該怎么測(cè)定呢？加標(biāo)應(yīng)該加多少呢？多謝了！

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10樓2011-11-14 15:35:58

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