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孟王氏金蟲 (小有名氣)
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[求助]
SDS-PAGE 蛋白膠跑膠問題
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很糾結(jié)，最近跑蛋白膠，我的都是這個(gè)樣子，別人的都沒有問題，我的發(fā)酵液中有金屬離子，可能有較多殘留，會不會是這個(gè)問題，應(yīng)該怎么解決呢?謝謝啊～～～ 好糾結(jié)，上面半塊膠什么都沒有 這個(gè)maker還好，別的就不行。maker左邊的是別人的蛋白。。右邊是我的蛋白 |
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shenxing325
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wanhscn(金幣+2): Good！ 2011-10-28 17:57:42
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖！ 2011-10-28 17:57:55
wanhscn(金幣+2): Good！ 2011-10-28 17:57:42
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)新蟲發(fā)帖！ 2011-10-28 17:57:55
| 根據(jù)你第一個(gè)圖來看，你這個(gè)上半部分完全沒有把蛋白質(zhì)分子截留住，所以你這個(gè)膠的濃度肯定是不均勻的，配膠是不是有問題。另外，其實(shí)電壓濃縮膠80v，分離膠120v就夠了，濃縮膠可以再長一點(diǎn)，記得要壓成一條直線喔~時(shí)間長一點(diǎn)沒關(guān)系的。還有，你的緩沖溶液的pH是不是有問題，那個(gè)影響也會很大的。不知道能不能幫到你 |
19樓2011-10-28 17:10:17
孟王氏
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2樓2011-10-25 00:30:02
jakelly
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wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-25 11:02:13
孟王氏(金幣+10): 給的建議很好，我的就是凝膠的問題，Ap過期導(dǎo)致的謝謝你 2011-10-25 23:46:33
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-10-25 11:02:13
孟王氏(金幣+10): 給的建議很好，我的就是凝膠的問題，Ap過期導(dǎo)致的謝謝你 2011-10-25 23:46:33
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出現(xiàn)這種現(xiàn)象有可能是凝膠的質(zhì)量不過關(guān)，凝膠時(shí)間不致導(dǎo)致凝膠內(nèi)部濃度不均勻，條帶跑歪；還有一種可能是電壓過高，受熱使條帶變形，考慮電泳時(shí)放入冰浴降溫，或調(diào)低電壓；還有就是可能是上樣的樣品問題，就是你說提到的。 如果還有其它問題，可以進(jìn)一步交流，我們實(shí)驗(yàn)室?guī)缀跆焯熳鰓estern. |
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孟王氏
3樓2011-10-25 01:29:18
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4樓2011-10-25 06:21:20
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wanhscn(金幣+3): 加樣前注意看一下膠的底部，盡量不要有氣泡，氣泡也會影響膠兩頭的電壓：Good！ 2011-10-25 11:01:53
孟王氏(金幣+5): 謝謝你的幫助，我的問題解決了，主要原因還是膠的濃度不均勻，電壓也有點(diǎn)偏高 2011-10-25 23:48:04
wanhscn(金幣+3): 加樣前注意看一下膠的底部，盡量不要有氣泡，氣泡也會影響膠兩頭的電壓：Good！ 2011-10-25 11:01:53
孟王氏(金幣+5): 謝謝你的幫助，我的問題解決了，主要原因還是膠的濃度不均勻，電壓也有點(diǎn)偏高 2011-10-25 23:48:04
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1：膠的濃度不均勻 2：電壓過高 一般150伏就很高了 3：加樣前注意看一下膠的底部，盡量不要有氣泡，氣泡也會影響膠兩頭的電壓 4：跑之前，要仔細(xì)清洗一下實(shí)驗(yàn)器材，保證兩個(gè)電極鐵絲上沒有雜物。 呵呵，做實(shí)驗(yàn)小心點(diǎn)總是沒有錯(cuò)的。 |
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5樓2011-10-25 09:31:12
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7樓2011-10-25 13:05:11
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