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SDS-PAGE跑谷蛋白無法濃縮，實驗圖彌撒的問題
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我在做種子谷蛋白SDS-PAGE的實驗。最近幾次實驗都出現(xiàn)了濃縮膠階段無法濃縮的問題，一直到分離膠都是彌散很寬。 然后結(jié)果就很不好分析，這兩張還好點，還有更無法分清楚的，條帶只能勉強數(shù)，但肯定是不能用的三。 之前一直是恒流20mA（橫流后，剛開始電壓大概50V）跑的，然后我今天又重新試了下，打算濃縮膠部分電壓搞高點看行不，就跑了恒壓120V（剛開始電流大概60mA），結(jié)果還是彌散，已經(jīng)到分離膠了還是彌散的。結(jié)果肯定也不行 敢問有經(jīng)驗的師兄師姐，能幫忙分析下原因嗎？？ 實驗圖 這個是我剛剛拍的照片，已經(jīng)到到了分離膠的地方了，完全沒有濃縮到�。。�！ [ Last edited by 66suyuan on 2011-10-21 at 12:17 ] |
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2樓2011-10-21 13:08:24
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【答案】應(yīng)助回帖
adslye(BioEPI+1): 2011-10-23 14:53:20
66suyuan(金幣+5): 2011-10-24 20:13:16
66suyuan(金幣+5): 2011-10-24 20:13:16
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分離膠我做過6、8、10、12%的，結(jié)果壓縮程度為12%最好，6%最差，條帶很拖。 在很多因素都沒法排除的情況下，120伏是不可取的，因為沖得快往往使得本來就差的效果更差。在效果很好的情況下你可以120，但效果本來就差的，就應(yīng)該更小，比如60，濃縮膠和分離膠都別太快。 膠凝固的因素，可能過硫酸銨失效，配新的。 電泳液的pH值也別搞錯了，反正現(xiàn)在還沒能找到原因，就每次都用新的，因為舊的可能臟。 跑膠的溫度雖然是如果是變性膠就無所謂，但現(xiàn)在效果這么差，不妨降溫。緩沖液4度預(yù)冷，跑的時候把槽放到裝了冰水混合物的盆里。 你的泡泡較多，如果SDS不超過1克每升，那你的緩沖液就該換了。 蛋白質(zhì)電泳的影響因素太多，很難說的，最好就是什么都換成新的，別去找原因了，可能會浪費時間。 |
6樓2011-10-22 06:03:50
adslye
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7樓2011-10-23 15:16:46
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