塞外雨

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1242.8
帖子: 1316
在線(xiàn): 95.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 632166

[交流] 陽(yáng)性菌破壁問(wèn)題求指導(dǎo)

0.3g菌體，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000轉(zhuǎn)離心1-2min還能得到菌體沉淀，延長(zhǎng)超聲時(shí)間也白搭，求指點(diǎn)。

謝謝

[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有180人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn) 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

bl21超聲破壁問(wèn)題已經(jīng)有4人回復(fù)
求助革蘭氏陽(yáng)性菌的高效破碎方法已經(jīng)有12人回復(fù)
革蘭氏陽(yáng)性菌RNA提取問(wèn)題已經(jīng)有5人回復(fù)
菌液PCR是陽(yáng)性，卻提不出來(lái)陽(yáng)性質(zhì)粒！求助已經(jīng)有31人回復(fù)
求助雙酶切驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的問(wèn)題已經(jīng)有12人回復(fù)
克隆假陽(yáng)性的問(wèn)題已經(jīng)有3人回復(fù)
求教真菌細(xì)胞破壁問(wèn)題已經(jīng)有3人回復(fù)
【求助/交流】大腸桿菌轉(zhuǎn)化PCR鑒定，沒(méi)有陽(yáng)性菌落已經(jīng)有5人回復(fù)
【求助/交流】革蘭氏陽(yáng)性菌的感受態(tài)細(xì)胞制備和轉(zhuǎn)化已經(jīng)有9人回復(fù)
【求助/交流】革蘭氏陽(yáng)性菌PCR問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】陽(yáng)性菌中質(zhì)粒提取方法已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】酵母菌破壁已經(jīng)有16人回復(fù)
【求助/交流】革蘭氏陽(yáng)性菌的破碎已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞2D用總蛋白樣品制備方法？已經(jīng)有4人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2011-10-25 14:54:27

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

藍(lán)月望寧

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 2
應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 665.4
帖子: 324
在線(xiàn): 145.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1267260

★ ★ ★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
塞外雨(金幣+1): 謝謝，還有更好的方法嗎？ 2011-10-26 10:41:43
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)回答更多問(wèn)題，有獎(jiǎng)勵(lì)! 2011-10-26 11:13:49

引用回帖:

1樓: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-25 07:54:27:
0.3g菌體，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000轉(zhuǎn)離心1-2min還能得到菌體沉淀，延長(zhǎng)超聲時(shí)間也白搭，求指點(diǎn)。

謝謝
[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]

酶法裂解呢？試試溶菌酶吧

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

2樓2011-10-26 10:23:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

塞外雨

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1242.8
帖子: 1316
在線(xiàn): 95.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 632166

引用回帖:

2樓: Originally posted by 藍(lán)月望寧 at 2011-10-26 10:23:05:
酶法裂解呢？試試溶菌酶吧

謝謝，溶菌酶對(duì)所有菌體破壁都有作用嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-10-26 10:43:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

海王之心2751

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 833.3
帖子: 115
在線(xiàn): 40.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 992064

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

你不說(shuō)清楚誰(shuí)幫你解答，目的產(chǎn)物都沒(méi)說(shuō)那些試劑或物理方面會(huì)被破壞。如果無(wú)所謂的話(huà)，可用酸，丙酮，液氮，高速細(xì)胞破碎器。。。。。。。。。。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

4樓2011-10-26 19:49:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

547star

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

MolEPI: 4
應(yīng)助: 184 (高中生)
金幣: 4273
帖子: 1308
在線(xiàn): 986.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 67494

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

只有稀釋了，多加點(diǎn)緩沖液再超聲吧。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

5樓2011-10-27 01:06:03

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

藍(lán)月望寧

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

MolEPI: 2
應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 665.4
帖子: 324
在線(xiàn): 145.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1267260

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
塞外雨(金幣+1): 2011-10-27 08:36:33

引用回帖:

3樓: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-26 03:43:21:
謝謝，溶菌酶對(duì)所有菌體破壁都有作用嗎？

溶菌酶只對(duì)陽(yáng)性菌有作用，主要通過(guò)破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。
對(duì)真菌來(lái)說(shuō)就可用蝸牛酶。主要看菌體的細(xì)胞壁性質(zhì)。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

6樓2011-10-27 07:47:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

eileen8519

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 1420.4
帖子: 243
在線(xiàn): 75.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 802150

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
塞外雨(金幣+1): 2011-10-27 08:36:37

菌體少的話(huà)，我們也一般用超聲破碎。400W,工作5S，間隔10S，20次一個(gè)循環(huán)，循環(huán)超聲3至4次，細(xì)胞一般還是可以破碎完的。最后12000RPM，離心10min。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

7樓2011-10-27 08:27:53

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

塞外雨

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 1242.8
帖子: 1316
在線(xiàn): 95.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 632166

引用回帖:

4樓: Originally posted by 海王之心2751 at 2011-10-26 19:49:29:
你不說(shuō)清楚誰(shuí)幫你解答，目的產(chǎn)物都沒(méi)說(shuō)那些試劑或物理方面會(huì)被破壞。如果無(wú)所謂的話(huà)，可用酸，丙酮，液氮，高速細(xì)胞破碎器。。。。。。。。。。

哦我的目的就是將其破壁后，將菌體的全蛋白提出來(lái)，不是表達(dá)的外源蛋白。

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2011-10-27 08:36:20

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

sl35537417

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 36 (小學(xué)生)
金幣: 1204.7
帖子: 396
在線(xiàn): 225.1小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 381094

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

1樓: Originally posted by 塞外雨 at 2011-10-25 14:54:27:
0.3g菌體，加入3ml的PBS或者裂解液，380W，超9.9s，停9.9s，20min，12000轉(zhuǎn)離心1-2min還能得到菌體沉淀，延長(zhǎng)超聲時(shí)間也白搭，求指點(diǎn)。

謝謝
[ Last edited by 塞外雨 on 2011-10-25 at 16:32 ]

可以試一下壓力破碎

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

9樓2011-10-27 09:09:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jiegou2006

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 13386
帖子: 367
在線(xiàn): 142.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 619431

★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

菌體超聲破碎、高速離心后肯定都有沉淀的，沉淀可能是完整細(xì)胞，也可能是破碎后的細(xì)胞碎片、變性蛋白、多糖等物質(zhì)，因此你是怎么判斷得到的沉淀就是沒(méi)有破碎的菌體呢？先把這個(gè)問(wèn)題搞清楚吧。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

10樓2011-10-27 09:18:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 303求調(diào)劑 +4	元夕元 2026-03-20	4/200	2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專(zhuān)碩) +4	allen-yin 2026-03-23	6/300	2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 317求調(diào)劑 +12	申子申申 2026-03-19	18/900	2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3	李子目 2026-03-22	3/150	2026-03-22 21:01 by 怎么釋?xiě)?/a>
[考研] 308求調(diào)劑 +3	墨墨漠 2026-03-21	3/150	2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 324求調(diào)劑 +6	lucky呀呀呀鴨 2026-03-20	6/300	2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 考研調(diào)劑 +4	來(lái)好運(yùn)來(lái)來(lái)來(lái) 2026-03-21	4/200	2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 0856材料專(zhuān)碩353求調(diào)劑 +4	NIFFFfff 2026-03-20	4/200	2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 考研調(diào)劑 +3	呼呼？~+123456 2026-03-21	3/150	2026-03-21 20:04 by 無(wú)際的草原
[考研] 265求調(diào)劑 +12	梁梁校校 2026-03-19	14/700	2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專(zhuān)業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +12	yangfz 2026-03-17	12/600	2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 307求調(diào)劑 +3	wyyyqx 2026-03-17	3/150	2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 299求調(diào)劑 +6	△小透明* 2026-03-17	6/300	2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5	材化逐夢(mèng)人 2026-03-18	5/250	2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 296求調(diào)劑 +6	www_q 2026-03-18	10/500	2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 321求調(diào)劑 +9	何潤(rùn)采123 2026-03-18	11/550	2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11	Ymlll 2026-03-18	15/750	2026-03-20 19:40 by 丁丁*
[考研] 0856調(diào)劑，是學(xué)校就去 +8	sllhht 2026-03-19	9/450	2026-03-20 14:25 by 無(wú)懈可擊111
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3	xwt。 2026-03-19	3/150	2026-03-19 11:22 by w沐陽(yáng)w
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4	我不是一根蔥 2026-03-18	4/200	2026-03-19 09:11 by 浮云166