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donnafeng金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
bl21超聲破壁問(wèn)題
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| 都說(shuō)判斷超聲破壁是否充分要看溶液是否澄清 但是我的菌在同樣的條件下 空的bl21破壁可以澄清 而轉(zhuǎn)化了的bl21只是比開(kāi)始的時(shí)候略微清了一點(diǎn) 再繼續(xù)超的話沉淀就會(huì)出現(xiàn)黑色的東西 這種情況是不是因?yàn)槲业目扇苄员磉_(dá)比較少 大部分生成了包涵體 還是因?yàn)槲业木彌_液ph和我的蛋白等電點(diǎn)太近了 一邊破壁釋放出蛋白來(lái)一邊就等電沉淀了？ |
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 蛋白質(zhì)表達(dá) |
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donnafeng
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2樓2012-02-21 10:34:22
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3樓2012-02-21 12:55:07
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donnafeng(金幣+5): ★有幫助 做過(guò)這個(gè)電泳的 問(wèn)題是有包涵體的時(shí)候是不是怎么超都不會(huì)清亮呢 2012-02-21 23:09:00
donnafeng(金幣+44): ★★★★★最佳答案 嗯 這下明白了 謝謝 2012-02-22 18:57:56
donnafeng(金幣+5): ★有幫助 做過(guò)這個(gè)電泳的 問(wèn)題是有包涵體的時(shí)候是不是怎么超都不會(huì)清亮呢 2012-02-21 23:09:00
donnafeng(金幣+44): ★★★★★最佳答案 嗯 這下明白了 謝謝 2012-02-22 18:57:56
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我最近也在做BL21菌的超聲破碎。按你的情況，你的蛋白是以包涵體形式表達(dá)的，如果想確定的話，可以超完聲離心把上清和沉淀做個(gè)SDS-PAGE，要是包涵體的話，大部分蛋白會(huì)在沉淀里。出現(xiàn)黑色沉淀是超聲功率有點(diǎn)大。 |
4樓2012-02-21 13:47:47
karin
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5樓2012-02-22 09:01:59
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