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donnafeng金蟲 (小有名氣)
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[求助]
bl21超聲破壁問題
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| 都說判斷超聲破壁是否充分要看溶液是否澄清 但是我的菌在同樣的條件下 空的bl21破壁可以澄清 而轉(zhuǎn)化了的bl21只是比開始的時候略微清了一點(diǎn) 再繼續(xù)超的話沉淀就會出現(xiàn)黑色的東西 這種情況是不是因為我的可溶性表達(dá)比較少 大部分生成了包涵體 還是因為我的緩沖液ph和我的蛋白等電點(diǎn)太近了 一邊破壁釋放出蛋白來一邊就等電沉淀了? |
蛋白質(zhì)表達(dá) |
銅蟲 (小有名氣)

金蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)
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我最近也在做BL21菌的超聲破碎。按你的情況,你的蛋白是以包涵體形式表達(dá)的,如果想確定的話,可以超完聲離心把上清和沉淀做個SDS-PAGE,要是包涵體的話,大部分蛋白會在沉淀里。出現(xiàn)黑色沉淀是超聲功率有點(diǎn)大。 |

木蟲 (小有名氣)

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