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反轉(zhuǎn)錄高手進(jìn)來~~
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| 我提的病毒RNA濃度大概是0.15 微克/微升,反轉(zhuǎn)錄用的酶是寶生的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶~反轉(zhuǎn)錄之后我直接取 1 微升cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增(25微升體系),電泳顯示的目標(biāo)條帶很亮,并且也沒有引物二聚體.但是呢,我將cDNA稀釋十倍以后再取1微升進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果全是引物二聚體,幾乎看不見目標(biāo)條帶,這是為何?就稀釋十倍居然有那么大的差別?? |
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【答案】應(yīng)助回帖
★
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-11-02 11:27:57
wanhscn(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-11-02 11:27:57
| 這么久也沒人來回答........我可不是高手，臉皮厚了點(diǎn)而已................可能是 模板濃度降低后，減少了引物與模板接觸的概率，從而增加了引物與引物之間接觸的概率，所以才會(huì)出現(xiàn)上述情況。這是我自己推測的，具體這方面沒有做實(shí)驗(yàn)去驗(yàn)證，不過你可以做一下這個(gè)，感覺也可以做個(gè)項(xiàng)目了，題目就叫“不同模板濃度對引物二聚體產(chǎn)生的影響” |
2樓2011-10-30 09:34:37
laverne
銅蟲 (小有名氣)
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3樓2011-11-01 17:24:07
4樓2011-11-01 22:31:09
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5樓2011-11-02 21:30:18
q307078056
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6樓2011-11-03 11:45:27
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