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changer32捐助貴賓 (小有名氣)
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[交流]
TCA/丙酮法提取植物蛋白 已有6人參與
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我用TCA/丙酮法提取植物蛋白，得到的蛋白在緩沖液中溶解性很差，呈膠質(zhì)狀，請問高手，這樣的現(xiàn)象正常嗎？ 另外更糟糕的是提到的蛋白做SDS-PAGE跑不出條帶，想請教問題出在哪里？針對我的實(shí)驗(yàn)材料，TCA/丙酮法可行嗎？ |
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jhu132llh(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-10-28 17:08:59
jhu132llh(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-10-28 17:08:59
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提取步驟參照文獻(xiàn) biotechnol.&biotechnol.EQ.24/2010/4 10g葉片，液氮磨成細(xì)粉，加20ml預(yù)冷的10%TCA-丙酮，充分混勻，-20℃放90min,4℃、11000rpm(約12000g)離心15min, 棄上清。 沉淀用20ml冷丙酮洗2次。 將沉淀在室溫空氣中晾干。 晾干后的沉淀加 6ml TLB緩沖液（8M Urea, 2M thiourea, 4%(w/v)CHAP, 0.4%(v/v)carrier ampho, 50mM DTT），充分混勻后保持5min. 提取物離心(11000rpm,15min,4℃),取上清液。 上清液加入4倍含10%（v/v)TCA的冷丙酮（其中含20mMDTT），在-20℃保持90min，混合物離心(11000rpm,15min,4℃),取沉淀。 沉淀用含20mMDTT的冷丙酮洗滌2次，沉淀風(fēng)干后加TLB緩沖液溶解，得蛋白。 ----------------------------------------------------------------------------------- 得到的蛋白在TLB緩沖液中溶解性很差，SDS-PAGE也跑不出條帶。 ---------------------------------------------------------------- 文獻(xiàn)中的離心條件是16000g, 但我的離心機(jī)只能達(dá)到12000g。是不是離心力不夠呢？ -------------------------------------------------- 多謝高手指點(diǎn)！ |
4樓2011-10-28 12:38:00
wangjetby
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