天際霧影

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[交流] 酵母雙雜交用X-gal顯色要注意哪些事��！

有蟲友們做個酵母雙雜交實驗么？用X-gal顯色有哪些特別注意啊？我做的結(jié)果不穩(wěn)定，猜測有些細節(jié)沒有注意到。求助大家，多多交流。

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1樓 2011-10-29 14:53:43

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xinnier

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現(xiàn)在還處在看文獻，了解階段；后面才開始做。大家可以交流討論( ⊙ o ⊙ )��！小木上關(guān)于這方面的···很少唉！

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2樓2011-11-01 21:18:40

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天際霧影

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2樓: Originally posted by xinnier at 2011-11-01 21:18:40:
現(xiàn)在還處在看文獻，了解階段；后面才開始做。大家可以交流討論( ⊙ o ⊙ )��！小木上關(guān)于這方面的···很少唉！

做酵母的確實好少�。�

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3樓2011-11-02 11:40:57

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l8843802

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x-gal staining ，x-gal要現(xiàn)配現(xiàn)用并且注意遮光保存。當(dāng)然z-buffer可以放置久一點。另外就是液氮冰凍菌的時候可以試試反復(fù)凍融，這樣會使細胞破碎的更加完全一些，便于染色液的滲透。還有就是，y2h驗證的蛋白只能是1對1的。任何通過第三方介導(dǎo)的interaction都無法檢測到。染色變藍得時間應(yīng)該在12h以內(nèi)，時間長了就有可能是長菌污染。

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4樓2011-12-11 00:22:40

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SHgenomics

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silicare: 編輯內(nèi)容 2012-07-31 16:16

*****************

[ Last edited by silicare on 2012-7-31 at 16:16 ]

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5樓2011-12-12 10:59:24

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hanyali2

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silicare: 金幣+2, 鼓勵新蟲發(fā)帖交流 2012-07-31 16:16:59

加X-gal染液的量要控制好，液體過多可能酵母就會相互污染,液體過少可能還沒染好濾紙就干了。

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6樓2012-04-16 20:44:46

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qian0wei

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4232431樓: Originally posted by SHgenomics at 2011-12-12 10:59:24
具體可以將菌落用轉(zhuǎn)移到濾紙上，然后將濾紙浸沒液氮中裂解然后在用裂解后的菌落進行顯色
順便做個小廣告···別別介意
本公司提供酵母雙雜交服務(wù)，10年酵母雙雜交經(jīng)驗，幫多個國內(nèi)知名實驗室做過酵母雙雜交技術(shù) ...

您好，我當(dāng)前也正準(zhǔn)備做顯色實驗，請問下具體操作步驟，是將菌挑在濾紙上，然后將濾紙浸沒在液氮中裂解（多少時間？反復(fù)浸沒？），然后在濾紙上直接加x-gal進行顯色？

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7樓2012-07-31 13:19:12

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qian0wei

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您好，我最近也想做X-gal顯色，特請教，請問具體是怎么做的呢，將菌落挑到濾紙上用液氮破碎后，將X-gal直接加到菌落上面顯色嗎，加多少呢，顯色多長時間啊，會不會很快就干了啊，謝謝

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8樓2012-07-31 13:44:13

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春暖花開LL

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8樓: Originally posted by qian0wei at 2012-07-31 13:44:13
您好，我最近也想做X-gal顯色，特請教，請問具體是怎么做的呢，將菌落挑到濾紙上用液氮破碎后，將X-gal直接加到菌落上面顯色嗎，加多少呢，顯色多長時間啊，會不會很快就干了啊，謝謝

我也想咨詢一下，這個問題。不知您解決沒

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9樓2014-07-13 21:26:06

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FangQu

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4樓: Originally posted by l8843802 at 2011-12-11 00:22:40
x-gal staining ，x-gal要現(xiàn)配現(xiàn)用并且注意遮光保存。當(dāng)然z-buffer可以放置久一點。另外就是液氮冰凍菌的時候可以試試反復(fù)凍融，這樣會使細胞破碎的更加完全一些，便于染色液的滲透。還有就是，y2h驗證的蛋白只能是 ...

您好，可以請教一下具體步驟嗎？

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10樓2019-06-19 20:32:47

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