天際霧影

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[交流] 酵母雙雜交用X-gal顯色要注意哪些事啊！

有蟲(chóng)友們做個(gè)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)么？用X-gal顯色有哪些特別注意��？我做的結(jié)果不穩(wěn)定，猜測(cè)有些細(xì)節(jié)沒(méi)有注意到。求助大家，多多交流。

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1樓 2011-10-29 14:53:43

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xinnier

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現(xiàn)在還處在看文獻(xiàn)，了解階段；后面才開(kāi)始做。大家可以交流討論( ⊙ o ⊙ )�。⌒∧旧详P(guān)于這方面的···很少唉！

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2樓2011-11-01 21:18:40

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天際霧影

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2樓: Originally posted by xinnier at 2011-11-01 21:18:40:
現(xiàn)在還處在看文獻(xiàn)，了解階段；后面才開(kāi)始做。大家可以交流討論( ⊙ o ⊙ )��！小木上關(guān)于這方面的···很少唉！

做酵母的確實(shí)好少��！

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3樓2011-11-02 11:40:57

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l8843802

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x-gal staining ，x-gal要現(xiàn)配現(xiàn)用并且注意遮光保存。當(dāng)然z-buffer可以放置久一點(diǎn)。另外就是液氮冰凍菌的時(shí)候可以試試反復(fù)凍融，這樣會(huì)使細(xì)胞破碎的更加完全一些，便于染色液的滲透。還有就是，y2h驗(yàn)證的蛋白只能是1對(duì)1的。任何通過(guò)第三方介導(dǎo)的interaction都無(wú)法檢測(cè)到。染色變藍(lán)得時(shí)間應(yīng)該在12h以內(nèi)，時(shí)間長(zhǎng)了就有可能是長(zhǎng)菌污染。

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4樓2011-12-11 00:22:40

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SHgenomics

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5樓2011-12-12 10:59:24

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hanyali2

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silicare: 金幣+2, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)發(fā)帖交流 2012-07-31 16:16:59

加X(jué)-gal染液的量要控制好，液體過(guò)多可能酵母就會(huì)相互污染,液體過(guò)少可能還沒(méi)染好濾紙就干了。

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6樓2012-04-16 20:44:46

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qian0wei

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4232431樓: Originally posted by SHgenomics at 2011-12-12 10:59:24
具體可以將菌落用轉(zhuǎn)移到濾紙上，然后將濾紙浸沒(méi)液氮中裂解然后在用裂解后的菌落進(jìn)行顯色
順便做個(gè)小廣告···別別介意
本公司提供酵母雙雜交服務(wù)，10年酵母雙雜交經(jīng)驗(yàn)，幫多個(gè)國(guó)內(nèi)知名實(shí)驗(yàn)室做過(guò)酵母雙雜交技術(shù) ...

您好，我當(dāng)前也正準(zhǔn)備做顯色實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)問(wèn)下具體操作步驟，是將菌挑在濾紙上，然后將濾紙浸沒(méi)在液氮中裂解（多少時(shí)間？反復(fù)浸沒(méi)？），然后在濾紙上直接加x-gal進(jìn)行顯色？

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7樓2012-07-31 13:19:12

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qian0wei

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您好，我最近也想做X-gal顯色，特請(qǐng)教，請(qǐng)問(wèn)具體是怎么做的呢，將菌落挑到濾紙上用液氮破碎后，將X-gal直接加到菌落上面顯色嗎，加多少呢，顯色多長(zhǎng)時(shí)間啊，會(huì)不會(huì)很快就干了啊，謝謝

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8樓2012-07-31 13:44:13

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8樓: Originally posted by qian0wei at 2012-07-31 13:44:13
您好，我最近也想做X-gal顯色，特請(qǐng)教，請(qǐng)問(wèn)具體是怎么做的呢，將菌落挑到濾紙上用液氮破碎后，將X-gal直接加到菌落上面顯色嗎，加多少呢，顯色多長(zhǎng)時(shí)間啊，會(huì)不會(huì)很快就干了啊，謝謝

我也想咨詢一下，這個(gè)問(wèn)題。不知您解決沒(méi)

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9樓2014-07-13 21:26:06

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FangQu

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4樓: Originally posted by l8843802 at 2011-12-11 00:22:40
x-gal staining ，x-gal要現(xiàn)配現(xiàn)用并且注意遮光保存。當(dāng)然z-buffer可以放置久一點(diǎn)。另外就是液氮冰凍菌的時(shí)候可以試試反復(fù)凍融，這樣會(huì)使細(xì)胞破碎的更加完全一些，便于染色液的滲透。還有就是，y2h驗(yàn)證的蛋白只能是 ...

您好，可以請(qǐng)教一下具體步驟嗎？

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10樓2019-06-19 20:32:47

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