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xuzhu598

鐵蟲 (小有名氣)

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[求助] 小白請(qǐng)問(wèn)，cDNA第一條鏈合成后如何做PCR了？

cDNA第一條鏈合成結(jié)束后，要做PCR擴(kuò)目的基因片段，該如何做呢？和正常的DNA做PCR一樣嗎？哪位有詳細(xì)點(diǎn)的步驟呀！

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1樓 2011-11-01 16:47:52

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xuzhu598

鐵蟲 (小有名氣)

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2樓: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:55:08:
和正常PCR一樣就可以了。不過(guò)cDNA里面不包括內(nèi)含子，設(shè)計(jì)引物的時(shí)候留意下，別把引物弄到內(nèi)含子上了。

那請(qǐng)問(wèn)下我PCR買的是Takara的，里面PCR的步驟與以前DNA的PCR步驟不是太一樣呀？麻煩版主幫幫忙！

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3樓2011-11-02 22:01:34

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和正常PCR一樣就可以了。不過(guò)cDNA里面不包括內(nèi)含子，設(shè)計(jì)引物的時(shí)候留意下，別把引物弄到內(nèi)含子上了。

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2樓2011-11-01 17:55:08

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wanhscn(金幣+3): 辛苦! 2011-11-03 10:53:54

引用回帖:

3樓: Originally posted by xuzhu598 at 2011-11-02 22:01:34:
那請(qǐng)問(wèn)下我PCR買的是Takara的，里面PCR的步驟與以前DNA的PCR步驟不是太一樣呀？麻煩版主幫幫忙！

不知道你自己的PCR條件如何，但是你給的這個(gè)程序是很常規(guī)的程序啊，你覺(jué)得哪里可能不妥當(dāng)？除了30個(gè)循環(huán)的步驟，可以在前面加個(gè)94℃/5 min預(yù)變性，最后加個(gè)72℃/5 min來(lái)延伸。其他沒(méi)什么特別的了。
72℃延伸時(shí)間根據(jù)產(chǎn)物長(zhǎng)度調(diào)整就可以了，一般Taq酶是1 min/kb。具體參照你的酶的說(shuō)明書吧。

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4樓2011-11-02 22:19:08

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引用回帖:

4樓: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-02 22:19:08:
不知道你自己的PCR條件如何，但是你給的這個(gè)程序是很常規(guī)的程序啊，你覺(jué)得哪里可能不妥當(dāng)？除了30個(gè)循環(huán)的步驟，可以在前面加個(gè)94℃/5 min預(yù)變性，最后加個(gè)72℃/5 min來(lái)延伸。其他沒(méi)什么特別的了。
72℃延伸時(shí)間 ...

嗯，你說(shuō)的我明白啦，謝謝啦，呵呵，好人開(kāi)開(kāi)心心呀1

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5樓2011-11-03 12:10:56

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