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[求助]
破碎細(xì)胞的各種方法
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| 本人欲測定胞內(nèi)代謝的有機(jī)酸，但是由于能力所限，找不到相關(guān)的文獻(xiàn)和資料參考，主要需要破碎細(xì)胞的各類詳細(xì)方法，望各位蟲友指教。 |
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4樓2011-11-01 20:16:11
錯(cuò)了，是胞內(nèi)有機(jī)酸 2樓2011-11-01 17:38:09
yang0071
木蟲 (職業(yè)作家)
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3樓2011-11-01 17:51:14
乘風(fēng)浮云
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【答案】應(yīng)助回帖
光2012(金幣+5): 2011-11-03 09:59:39
| 我破碎細(xì)胞用的是溶菌酶和超聲波細(xì)胞破碎儀結(jié)合使用的方法破碎菌體。溶菌酶的添加量為0.1 g/100 mL菌懸液，待溶菌酶完全溶解后，置于35℃搖床培養(yǎng)箱160 r/min 破除細(xì)胞壁2 h。然后，使用超聲波細(xì)胞破碎儀輔助破碎菌體，其工作參數(shù)為：功率600 w，超聲時(shí)間5 min，工作2 s，間歇2 s，同時(shí)菌懸液要冰浴，以免溫度過高，影響酶的活性。采用革蘭氏染色法檢測菌體是否破碎。這要看你是什么菌體啦，要是真核細(xì)胞，應(yīng)該更好破碎的！最近看的一篇英文文獻(xiàn)，是菌懸液凍融后，等體積TEA緩沖液稀釋，在4度下用French pressure cell 下破碎的，壓力位60MPa。多找找應(yīng)該可以找到的，實(shí)在找不到直接相關(guān)的步驟，就用別人的一些方法，嘗試看看用在自己試驗(yàn)中驗(yàn)證下可不可行。 |
5樓2011-11-02 11:00:35
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