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sunxuyan0608

鐵蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
帖子: 9
在線: 2.9小時(shí)
蟲號(hào): 1185780
注冊(cè): 2011-01-08
專業(yè): 獸醫(yī)免疫學(xué)

[求助] 請(qǐng)教一個(gè)關(guān)于BHK-21細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的問(wèn)題

各位大俠，我最近在做瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。用的是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，載體是pcDNA3.1，插入了一個(gè)干擾素的基因，用堿裂解法大量提取的質(zhì)粒，OD260nm/280nm為1.9，應(yīng)該很純了。我轉(zhuǎn)染了陽(yáng)性質(zhì)粒，同時(shí)轉(zhuǎn)染了空載體做陰性對(duì)照，還有空細(xì)胞做陰性對(duì)照。
轉(zhuǎn)染兩天后做間接免疫熒光，一抗為我自己做的多抗血清（陽(yáng)性血清和陰性血清），二抗為商業(yè)化的熒光二抗，結(jié)果奇怪的是雖然我的陽(yáng)性質(zhì)粒出現(xiàn)了熒光，但是我的陰性血清對(duì)照，空載體陰性對(duì)照和空細(xì)胞陰性對(duì)照也都出現(xiàn)了熒光，而且熒光和陽(yáng)性質(zhì)粒一樣明顯。
已經(jīng)重復(fù)做了三次試驗(yàn)，結(jié)果都是這樣的，而且更換過(guò)一抗和空載體，真的是找不出原因了。

懇請(qǐng)大家?guī)兔�！萬(wàn)分感謝！

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1樓 2011-11-02 10:39:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

linyingjia

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

BioEPI: 3
應(yīng)助: 105 (高中生)
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散金: 1
紅花: 22
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在線: 234.5小時(shí)
蟲號(hào): 668860
注冊(cè): 2008-12-05
性別: GG
專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

你的轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒不合格應(yīng)該在1.8-1.85 用qiagen的大提試劑盒吧效果不錯(cuò)

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2011-11-02 14:25:24

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