 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 537 | 回復: 1 | ||
[求助]
試劑盒能否在我的實驗中使用
|
|
各位前輩，我的實驗第一步是提取DNA，后面要做SSR及同源克隆等，但是由于我提取的是真菌的孢子，存在的問題是孢子量很少，而且孢子破壁很困難。為了解決孢子量少的問題，前一段時間我用了液氮研磨法、液氮加石英砂研磨法、直接CTAB研磨法等使孢子盡量破壁，但是效果都不理想，提到的DNA要么檢測不出來，要么被機械破壞，機械破壞是研磨過程中造成的，可是不盡力研磨的話孢子破不了啊,本來孢子就沒多少。當然有同學跟我說，沒檢測出來的DNA可以直接做PCR的，而且有條帶，可是我不想冒著這樣的風險，最好還是檢測出來比較好。于是實在沒有辦法的情況下，我想試一下試劑盒，可是師姐說試劑盒提的少而且效果不一定好，那么針對我這種材料少到1—5mg的且難破壁的東西來說，試劑盒能提出來嗎？或者說提出來會不會出現(xiàn)沒有條帶之類的情況出現(xiàn)啊！ 番外：主要是破壁困難，孢子的量倒是能夠加大一些到10mg左右~ 求助，小女子在這里跪謝了~ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有164人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
湖北師范大學招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 大片段連接問題
已經(jīng)有20人回復
- 我現(xiàn)在要補做一個腫瘤耐藥實驗，需要用什么方法？
已經(jīng)有14人回復
- 【求助/交流】RACE 試劑盒問題
已經(jīng)有6人回復
【答案】應助回帖
doudouxiong(金幣+5): 2011-11-03 22:59:12
|
主要問題： 1.破壁難（眾所周知孢子破壁難...） 2.樣品量少 針對以上難點，有如下建議： 1.1尋找最優(yōu)化的破碎方法你破碎方法的嘗試很好。至于提到的DNA檢測結(jié)果具體怎樣？有電泳圖及OD？注：個人經(jīng)驗認為，在液氮研磨（不管你是否加石英砂進去）過程是不存在你所說的機械破壞DNA問題的。如果你所提的DNA有降解情況，應該從整個提到過程找原因，如操作劇烈，槍頭沒有鈍化處理等等。液氮加石英砂是個不錯的組合 1.2優(yōu)化裂解體系 不同的樣品適用不同的裂解液。主要有以CTAB及SDS為主的兩大裂解體系，建議可以嘗試一下。另外延長孵育時間（65度）有時也有作用。 1.3可以咨詢或聯(lián)系試劑盒公司的技術(shù)支持尋求相關事宜的幫助，現(xiàn)在很多技術(shù)支持都很nice的。。。不過的確有像你師姐所說的情況，產(chǎn)量低。但也不排除有些公司的有比較優(yōu)秀的針對孢子的純化試劑盒。 2.1樣品量少這個問題俺就恕莫能助了....千方百計增加多點孢子……^-^ 而且即使10mg孢子所含的DNA也不一定見得有很多。以下只供參考： 一般情況植物新鮮葉片100mgDNA產(chǎn)量5-30ug。（10mg孢子-0.5ug DNA?100ng DNA?又如何能很清楚的被你檢測到呢？） 最后，如果實在沒辦法， 檢測不到直接擴PCR也不失為一個好方法。 |
2樓2011-11-03 11:05:36
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 doudouxiong 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +10 | 木蟲er12138 2026-04-01 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩322分 +6 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +10 | 素年祭語 2026-03-31 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +6 | 莫xiao 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +7 | hyzzzzzzz. 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +3 | 兔突突突， 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +3 | 321* 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +9 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +10 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 生醫(yī)工0831調(diào)劑求推薦 +4 | 小熊睿睿_s 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+12
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑 +6 | 大饞小子 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑286 +5 | tgs_001 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +17 | oatmealR 2026-03-29 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 一志愿廈門大學材料工程專碩354找調(diào)劑！�。� +5 | 貝唄鋇鋇 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +8 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +6 | Amber00 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭取九點睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | lim0922 2026-03-26 | 4/200 |
|