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lcdshanshi鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
co-ip求救 已有1人參與
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小弟現(xiàn)在在做co-ip實驗，但是重復(fù)了n遍都得不到結(jié)果，如圖所示，我用得是santa cruz的proteinA/G ,做的IP條帶很特異也很亮，但是co-ip的條帶就非常模糊，而且在可能出現(xiàn)的地方有拖帶，每次都是這樣，只有一次出現(xiàn)陽性結(jié)果，然后再也重復(fù)不出來了，簡要步驟如下： 1. cells were lysed withNP40 lysis buffer (Beyotime) 2. precleared with 20 ul protein A/G agarose beads(1:10) coupled with mouse IgG for 2 h.Centrifugation at 2500rpm and transfer 300ul supernatant for co-ip, 100ul for NC. 3. Afer incubate with antibody and protein A/G,The beads were washed thrice with 1ml PBS 各位大神幫我看看，到底是咋回事應(yīng)該怎樣改動。謝謝。 |
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5樓2018-05-04 09:32:31
lcdshanshi
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 帖子: 97
- 在線: 93小時
- 蟲號: 1317202
- 注冊: 2011-06-07
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- 專業(yè): 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
2樓2011-11-03 08:15:20
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4樓2011-11-04 14:12:47
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