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一生隨袁木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
談?wù)劥蠹襀PLC摸條件經(jīng)驗(yàn)
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想請(qǐng)教下 群里高手 液相摸條件的經(jīng)驗(yàn) ，最近發(fā)出一對(duì)未知天然產(chǎn)物 不過(guò)液相中兩峰始終分離效果不好 ，清群中高手 給些HPLC摸條件的經(jīng)驗(yàn) 謝謝了 [ Last edited by novus on 2011-11-3 at 12:01 ] |
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 藥研析疑 | 天然藥化 |
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癡夷子皮
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qinhy: PhEPI+1, 不錯(cuò)的總結(jié)~ 2012-03-29 08:35:05
qinhy: PhEPI+1, 不錯(cuò)的總結(jié)~ 2012-03-29 08:35:05
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1、如果能有相關(guān)的文獻(xiàn)或資料參考，估計(jì)會(huì)相對(duì)比較簡(jiǎn)單。 2、條件摸索 a、樣品性質(zhì) 主要了解化合物的結(jié)構(gòu)、分子量、pKa、UV、樣品濃度范圍、溶解度等。 b、色譜柱選擇 樣品能溶于水-有機(jī)混合液的大多數(shù)樣品（特別是中性或非離子化合物），可以選擇反相HPLC，流動(dòng)相選擇水-有機(jī)溶劑，色譜柱可以選擇C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比較多。 樣品為離子或可電離的化合物（特別是堿性或陽(yáng)離子樣品），可以選擇離子對(duì)HPLC，流動(dòng)相選擇水-有機(jī)溶劑，控制pH的緩沖液和離子對(duì)試劑，色譜柱可選擇C18、C8、氰基。一般C18用得比較多。 若反相或離子對(duì)HPLC無(wú)效時(shí)，或樣品不溶于水-有機(jī)混合液�？梢赃x擇正相HPLC體系。流動(dòng)相選擇有機(jī)溶劑混合液，色譜柱選擇氰基、氨基、硅膠、二醇基。 c、初始分離條件（相對(duì)較好的首要選擇、等度） 色譜柱：150X4.6mm、5um、固定相為C18或C8 流動(dòng)相：緩沖液-乙腈，緩沖液可選擇純水或緩沖鹽（濃度10~30mM）（若中性樣品，無(wú)需使用緩沖鹽）并用酸堿調(diào)控pH（如果pH小于2.5，建議選擇pH穩(wěn)定的色譜柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以選擇80~100%。 離子對(duì)等添加劑，開(kāi)始時(shí)請(qǐng)不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱溫35~40℃。 樣品：（最好以流動(dòng)相溶解樣品）進(jìn)樣體積小于25uL，進(jìn)樣量小于100ug。 d、液相方法基本目標(biāo) 分離度：R大于1.5 分離時(shí)間：5~10min較理想 定量：RSD小于2% 壓力：基本要求小于200bar（20M） 針對(duì)基本目標(biāo)，按實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整，譬如流動(dòng)相實(shí)際組分比例，緩沖鹽濃度及pH，柱溫，梯度等。 |
9樓2012-03-24 13:08:06
kkbyb
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2樓2011-11-03 16:02:55
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4樓2012-02-17 10:55:52
erty66k
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5樓2012-03-21 13:36:19
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