 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1887 | 回復(fù): 6 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
求高手解救熒光定量的問題
|
||
|
最近最熒光定量試驗，一直很不順，用的是bioer的試劑，IQ5的機器。做的是miRNA的相對定量表達，用的是∆∆CT法，所擴增的片段有點大，但在200bp之內(nèi)，出現(xiàn)很奇怪的現(xiàn)象，附上圖： 擴增曲線： 溶解曲線： 很是疑惑為什么前面的曲線不平，應(yīng)該不是機器的問題，因為其他人做沒有出現(xiàn)這樣的現(xiàn)象，我把濃度給變大10倍也沒有很好的改觀，求高手指教，非常感謝！ 擴增曲線 溶解曲線 溶解曲線的倒數(shù)圖 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有128人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR的一個問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】求助，關(guān)于熒光定量PCR問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR的小問題,請高手指點 【問題已解決】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR中cdna合成的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量PCR引物跨內(nèi)含子的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量PCR中組織保存問題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】相對熒光定量pcr檢測基因表達差異問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】實時熒光定量pcr的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光定量引物設(shè)計遇到的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
3樓2011-11-23 10:40:04
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應(yīng)助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞衰老
- 管轄: 分子生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
wanhscn(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助！ 2011-11-06 08:16:04
小橘子~(金幣+1): 非常感謝你認真的分析和建議 2011-11-06 10:04:03
wanhscn(金幣+2): 鼓勵應(yīng)助！ 2011-11-06 08:16:04
小橘子~(金幣+1): 非常感謝你認真的分析和建議 2011-11-06 10:04:03
|
你說的“前面的曲線不平”是什么意思？ 從你的擴增曲線來看，是模板濃度太低了。按照2的N次方擴增，模板濃度大10被，Ct值只變小3，10倍還是不夠的。一般情況下，15~20個循環(huán)左右擴增曲線起來比較合適。 你的部分樣品35個循環(huán)后才有擴增，有點夸張……因為一般認為，陰性對照35個循環(huán)之前沒有擴增是正常的…… 雖然這樣子也能定量，但是這么多循環(huán)才有擴增，有可能是非特異的擴增了，還是想辦法加大模板濃度吧。反轉(zhuǎn)錄的時候多加些RNA，可以取試劑盒推薦的RNA用量的上限。 從融解曲線來看，擴增還是比較特異的。你的特異的峰有高有低，是因為PCR產(chǎn)物還沒達到飽和（從擴展曲線看，離平臺期還遠呢）。 綜上，主要的問題，還是模板濃度過低。好在，擴增的特異性不錯。  |
2樓2011-11-06 00:02:40
保護你的大樹
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.8
- 散金: 6
- 帖子: 104
- 在線: 17.8小時
- 蟲號: 1074603
- 注冊: 2010-08-14
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
4樓2011-11-24 00:20:34
shaquila
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 37 (小學(xué)生)
- 金幣: 1484.8
- 散金: 59
- 紅花: 14
- 帖子: 553
- 在線: 182.3小時
- 蟲號: 654839
- 注冊: 2008-11-15
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2011-11-24 11:37:57
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +5 | 彼岸t 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 070300化學(xué)354求調(diào)劑 +6 | 101次希望 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求收留 +5 | 1943443204 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +8 | 邱gl 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10 | 你好明天你好 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 348求調(diào)劑 +4 | 小懶蟲不懶了 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 294分080500材料科學(xué)與工程求調(diào)劑 +4 | 柳溪邊 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | Ymlll 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +3 | Aoyijiang 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求老師收我 +3 | zzh16938784 2026-03-23 | 3/150 |
|