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HPLC2008木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請問葡聚糖凝膠LH-20的使用!
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請問葡聚糖凝膠LH-20的使用!小弟首次使用,凝膠,請問可以用氯仿-甲醇混合溶劑沖嗎?各種溶劑的凝膠柱分離化合物有沒有什么優(yōu)勢,要注意些什么?請高手指點! 先謝過! |
新蟲 (正式寫手)
主管區(qū)長 (職業(yè)作家)
制粒能手
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可以用氯仿甲醇沖,此時為正相系統(tǒng),適用于極性小的樣品,但是必須在溶劑中充分溶脹后上柱。 流動相如果想梯度的話要慢慢過渡,否則可能因為比例改變過大造成凝膠的收縮。 極性大的樣品可以用甲醇水溶劑系統(tǒng)。 注意: 1.樣品用最少量的流動相溶解,一定要過濾; 2.最好是濕法上柱; 3.控制流速,餾分最好細接,如1/10或1/20保留體積 4.柱子盡量長一些 |

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Sephadex LH20 洗脫溶劑 Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類:反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫,以甲醇--水系統(tǒng)最為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,最后用100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿--甲醇最為常見,先用50%氯仿--甲醇,逐漸增加甲醇比例,最后用100%甲醇沖柱。 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇 如果樣品極性大,這選用反相溶劑洗脫(甲醇--水),樣品用最少體積的甲醇--水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(一定要濾喔!要是把Sephadex LH20 堵啦,就得將Sephadex LH20 的柱頭部分棄去,很心痛呀)。如果樣品極性小,這選用正相溶劑洗脫(氯仿--甲醇),樣品用最少體積的氯仿--甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。 分離的技巧 。1) 流速不可太快,切切不可新急,所謂欲速則不達。 (2)柱子盡可能長, Sephadex LH20 柱長的增加將極大地改善分離,所不要吝惜填料,寧可將填料全裝在一根大柱子中,不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢兵力,打擊敵人。 (3) 餾分一定要接的細,可1/10,或1/20 個保留體積接成一餾分。 。4) 洗脫體積一般為2-3個保留體積,對特殊保留強的化合物,可洗脫5個保留體積。 。5)鞣質成分死吸附嚴重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣質 (6)Sephadex LH20 對黃酮類成分的分離效果極佳,方法很成型,有大量文獻參考。 。7)填料反復使用,每次用完,一般可用甲醇將柱子洗干凈,然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來,待用。 |
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