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HPLC2008木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)葡聚糖凝膠LH-20的使用!
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請(qǐng)問(wèn)葡聚糖凝膠LH-20的使用!小弟首次使用,凝膠,請(qǐng)問(wèn)可以用氯仿-甲醇混合溶劑沖嗎?各種溶劑的凝膠柱分離化合物有沒(méi)有什么優(yōu)勢(shì),要注意些什么?請(qǐng)高手指點(diǎn)! 先謝過(guò)! |
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7樓2011-12-25 08:47:33
豆哥
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【答案】應(yīng)助回帖
★
jiangchunyong(金幣+1): 謝謝 2011-11-06 12:10:53
HPLC2008(金幣+2): 感謝，希望能詳細(xì)點(diǎn)！ 2011-11-06 20:10:41
jiangchunyong(金幣+1): 謝謝 2011-11-06 12:10:53
HPLC2008(金幣+2): 感謝，希望能詳細(xì)點(diǎn)！ 2011-11-06 20:10:41
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可以用氯仿甲醇沖，此時(shí)為正相系統(tǒng)，適用于極性小的樣品，但是必須在溶劑中充分溶脹后上柱。 流動(dòng)相如果想梯度的話要慢慢過(guò)渡，否則可能因?yàn)楸壤淖冞^(guò)大造成凝膠的收縮。 極性大的樣品可以用甲醇水溶劑系統(tǒng)。 注意： 1.樣品用最少量的流動(dòng)相溶解，一定要過(guò)濾； 2.最好是濕法上柱； 3.控制流速，餾分最好細(xì)接，如1/10或1/20保留體積 4.柱子盡量長(zhǎng)一些 |
2樓2011-11-06 09:56:15
lijingjeanne
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【答案】應(yīng)助回帖
★
qinhy(金幣+1, PhEPI+1): 多謝回帖~ 2011-11-17 21:57:30
HPLC2008(金幣+4): 謝謝！詳細(xì)！ 2011-11-21 14:49:27
HPLC2008(金幣+2): ★★★很有幫助 謝謝! 2012-01-19 00:08:11
qinhy(金幣+1, PhEPI+1): 多謝回帖~ 2011-11-17 21:57:30
HPLC2008(金幣+4): 謝謝！詳細(xì)！ 2011-11-21 14:49:27
HPLC2008(金幣+2): ★★★很有幫助 謝謝! 2012-01-19 00:08:11
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Sephadex LH20 洗脫溶劑 Sephadex LH20 洗脫溶劑因分為兩類(lèi)：反相和正相兩種。用得最多的是反相溶劑洗脫，以甲醇－－水系統(tǒng)最為常見(jiàn)，先用水，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿－－甲醇最為常見(jiàn)，先用50％氯仿－－甲醇，逐漸增加甲醇比例，最后用100％甲醇沖柱。 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇 如果樣品極性大，這選用反相溶劑洗脫（甲醇－－水），樣品用最少體積的甲醇－－水（盡可能甲醇少一些）溶解，過(guò)濾后，濕法上樣（一定要濾喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得將Sephadex LH20 的柱頭部分棄去，很心痛呀）。如果樣品極性小，這選用正相溶劑洗脫（氯仿－－甲醇），樣品用最少體積的氯仿－－甲醇溶解，過(guò)濾后，濕法上樣。 分離的技巧 �。�1） 流速不可太快，切切不可新急，所謂欲速則不達(dá)。 �。�2）柱子盡可能長(zhǎng)， Sephadex LH20 柱長(zhǎng)的增加將極大地改善分離，所不要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所謂集中優(yōu)勢(shì)兵力，打擊敵人。 �。�3） 餾分一定要接的細(xì)，可1／10，或1／20 個(gè)保留體積接成一餾分。 �。�4） 洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保留體積。 �。�5）鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì) �。�6）Sephadex LH20 對(duì)黃酮類(lèi)成分的分離效果極佳，方法很成型，有大量文獻(xiàn)參考。 （7）填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái)，待用。 |
3樓2011-11-16 10:08:43
4樓2011-11-16 21:27:13
HPLC2008
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5樓2011-12-22 23:29:35
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6樓2011-12-23 08:53:39
HPLC2008
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8樓2011-12-25 18:29:44
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