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xiaoyang123

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[求助] PCR目的條帶沒(méi)跑出，但是跑出了特異性很強(qiáng)的單一條帶，是什么原因呢？

PCR目的條帶沒(méi)跑出，但是跑出了特異性很強(qiáng)的單一條帶，是什么原因呢？

其實(shí)不是很確定目的基因是否存在，如果存在，目的條帶的期望長(zhǎng)度是1300bp左右，但是跑出的單一條帶卻在900bp左右，而且用的是TAKARA HS Taq酶（高特異性Taq酶）……這會(huì)是什么原因造成的呢？

高特異性聚合酶是否只是防止突變，并不會(huì)減少假陽(yáng)性呢？

但是跑出了單一帶，怎么偏偏不是目的條帶呢，太詭異了~~

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1樓 2011-11-20 22:04:03

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zlu520

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

2樓: Originally posted by zlu520 at 2011-11-20 23:51:40:
有可能擴(kuò)增不完全。。。。

酶沒(méi)問(wèn)題的話(huà)。引物也可造成。

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無(wú)完人！

9樓2011-11-24 15:58:29

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zlu520

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【答案】應(yīng)助回帖

xiaoyang123(金幣+1): 或許是擴(kuò)增不完全，可是延伸時(shí)間為2min，應(yīng)該已經(jīng)比較長(zhǎng)了吧，是否有其它原因?qū)е铝藬U(kuò)增不完全~~ 2011-11-24 14:35:33

引用回帖:

1樓: Originally posted by xiaoyang123 at 2011-11-20 22:04:03:
PCR目的條帶沒(méi)跑出，但是跑出了特異性很強(qiáng)的單一條帶，是什么原因呢？

其實(shí)不是很確定目的基因是否存在，如果存在，目的條帶的期望長(zhǎng)度是1300bp左右，但是跑出的單一條帶卻在900bp左右，而且用的是TAKARA HS T ...

有可能擴(kuò)增不完全。。。。

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無(wú)完人！

2樓2011-11-20 23:51:40

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allmessup

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xiaoyang123(金幣+1): 又一種可能 2011-11-24 14:35:57

引用回帖:

2樓: Originally posted by zlu520 at 2011-11-20 23:51:40:
有可能擴(kuò)增不完全。。。。

re~如果存在相似度高的序列片段有可能被誤以為是復(fù)制終點(diǎn)~

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Ipsascientiapotestasest.

3樓2011-11-21 07:00:28

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moqiyilei

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【答案】應(yīng)助回帖

xiaoyang123(金幣+1): 引物在Genebank上比對(duì)匹配度都不高，是直接來(lái)自文獻(xiàn)的，所以實(shí)驗(yàn)一開(kāi)始就有點(diǎn)空中樓閣的感覺(jué) 2011-11-24 14:36:54

引物blast一下，看是否具有特異性。

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4樓2011-11-21 09:09:51

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