 |
 |
 |
| 24小時熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » RT-PCR求助
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 932 | 回復: 8 | ||
dreamshaker銅蟲 (正式寫手)
|
[求助]
RT-PCR求助
|
|
各位大蝦： 新手上路，請指教啊。最近做RT-PCR，內參已經調的差不多了，開始擴目的條帶了，但是結果卻不盡人意，很是焦急啊。主要難題就是擴出的條帶弱，而且有引物二聚體的存在，重復性差。我說的在詳細一些，目的條帶是300-500bp左右，我用的是退火溫度是55度，35cycles。是不是是退火溫度的原因？還有啊，引物單子上對的Tm值有兩個Tm（1MNa）和Tm（0.05M Na）時的，我應該用那一個啊，如何設計引物的退火溫度啊 ，請各位不吝賜教啊，將很感激啊。 再附上劣圖一張，以圖為參考給出些意見啊。 對于圖片再做些說明，上下兩個目的基因，有點marker（DL2000），5個挨緊的條帶是目的條帶的不同時間處理，就跑成這個樣子了啊，慚愧啊，請各位給點意見。 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有158人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 819723
- 注冊: 2009-07-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學
2樓2011-11-24 13:50:26
cjzyfx
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 1927.1
- 散金: 181
- 紅花: 2
- 帖子: 629
- 在線: 363.2小時
- 蟲號: 657903
- 注冊: 2008-11-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
3樓2011-11-24 13:56:38
blackrose8089
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 16
- 應助: 100 (初中生)
- 貴賓: 0.11
- 金幣: 10639.6
- 散金: 155
- 紅花: 30
- 沙發(fā): 6
- 帖子: 3703
- 在線: 790.4小時
- 蟲號: 614948
- 注冊: 2008-09-28
- 專業(yè): 植物學研究的新技術、新方
4樓2011-11-24 19:20:22
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5): Good！看樓主的圖似乎是做半定量，直接普通的PCR比較條帶亮度呢。不過，有二聚體確實是不行的。 2011-11-24 21:31:20
dreamshaker(金幣+4): 謝謝你的建議！ 2011-11-25 12:36:14
西瓜(金幣+5): Good！看樓主的圖似乎是做半定量，直接普通的PCR比較條帶亮度呢。不過，有二聚體確實是不行的。 2011-11-24 21:31:20
dreamshaker(金幣+4): 謝謝你的建議！ 2011-11-25 12:36:14
| 退火溫度直接引用你引物軟件設計上的溫度，引物單上的溫度不一定正確，你的片段貌似長了點，一般在150到200比較好，有引物二聚體應該是你的引物質量不是很好，如果有時間還是重新設計一對吧，這個對你后面的實驗非常的重要，另外你可以現(xiàn)在普通上PCR試驗一下，摸索合適的溫度再放到定量PCR上，你說你的重復性不是很好，根據(jù)我的經驗有兩個原因，一個是你的基因如果是低表達的，你可以適當增加模板濃度，另外就是你在加樣的時候操作不一致，不連貫，建議在加樣的時候先寫好一個單子，具體到每個樣加多少，加的順序是什么樣的，盡量在實驗的時候別臨時思考。 |
5樓2011-11-24 21:04:46
dreamshaker
銅蟲 (正式寫手)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 25.5
- 散金: 11
- 紅花: 3
- 帖子: 319
- 在線: 153.4小時
- 蟲號: 1164834
- 注冊: 2010-12-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
6樓2011-11-24 22:01:48
dreamshaker
銅蟲 (正式寫手)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 25.5
- 散金: 11
- 紅花: 3
- 帖子: 319
- 在線: 153.4小時
- 蟲號: 1164834
- 注冊: 2010-12-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學
7樓2011-11-24 22:06:20
8樓2011-11-25 12:12:57
西瓜
榮譽版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 應助: 94 (初中生)
- 貴賓: 3.157
- 金幣: 1849.6
- 散金: 11458
- 紅花: 116
- 沙發(fā): 21
- 帖子: 7553
- 在線: 1449.5小時
- 蟲號: 271749
- 注冊: 2006-08-13
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞衰老
- 管轄: 分子生物
9樓2011-11-25 16:17:40
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 dreamshaker 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿武理085500機械專業(yè)總分300求調劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料學求調劑 +5 | Stella_Yao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
[考研] 281求調劑 +3 | Koxui 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08工學調劑 +12 | 用戶573181 2026-03-20 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 生物學學碩求調劑 +6 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +4 | Ymlll 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 305分求調劑（食品工程） +5 | Sxy112 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 276求調劑。有半年電池和半年高分子實習經歷 +9 | 材料學257求調劑 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 335求調劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學085700資源與環(huán)境，總分308求調劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 319求調劑 +4 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學070300 學碩336求調劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 285求調劑 +6 | ytter 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學碩333求調劑 +3 | 北道巷 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 313求調劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0805材料320求調劑 +3 | 深海物語 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279求調劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求 B區(qū) 調劑 +3 | 邱gl 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調劑 +3 | 領帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|