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關(guān)于分光光度計測蛋白的問題 求助于大家
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有幾個問題想請教大家 我制備的昆蟲血淋巴粗提液,沒有加PMSF和苯基硫脲,用分光光度計測蛋白濃度,剛提完時測的是0.357,然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里,過了幾天再測(方法一樣),吸光值變成了0.442,也就是里面蛋白增多了?這是怎么回事呢,是不是要放在-20°才可以? 還有一個 大家都說血緩要加PMSF和苯基硫脲,我買來的都是晶體,我直接往離心管里加然后再加血緩,可是,晶體還是晶體,根本不溶解啊,這樣,PMSF和苯基硫脲能起到作用嗎? 謝謝大家?guī)兔獯鹨幌拢?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/tongue.gif" align="absmiddle" border="0"> |
【分子生物】EPI帖 |
木蟲之王 (文壇精英)
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你做SDS-PAGE的目的是什么?無非是想正確反映你組織里面蛋白的組成或者定位某蛋白的大小等原因,你的蛋白都降解了,那你跑這個電泳還有什么意義?PMSF是配成100mM的貯液,使用時的終濃度是1mM,所以體積應(yīng)該也占不了多少,對實驗沒有什么明顯影響。 PMSF在水中的半衰期是半個小時左右。為啥不是破完組織,測完濃度馬上跑電泳呢?這些實驗一上午都用不了應(yīng)該就能就輕松做完了的。跑電泳的那點點樣品應(yīng)該還是有的吧?20ul 就足夠了... |


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