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關(guān)于分光光度計(jì)測(cè)蛋白的問(wèn)題 求助于大家
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有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教大家 我制備的昆蟲(chóng)血淋巴粗提液，沒(méi)有加PMSF和苯基硫脲，用分光光度計(jì)測(cè)蛋白濃度，剛提完時(shí)測(cè)的是0.357，然后就把剩下的粗提液放在了4度冰箱里，過(guò)了幾天再測(cè)（方法一樣），吸光值變成了0.442，也就是里面蛋白增多了？這是怎么回事呢，是不是要放在-20°才可以？ 還有一個(gè) 大家都說(shuō)血緩要加PMSF和苯基硫脲，我買(mǎi)來(lái)的都是晶體，我直接往離心管里加然后再加血緩，可是，晶體還是晶體，根本不溶解啊，這樣，PMSF和苯基硫脲能起到作用嗎？ 謝謝大家?guī)兔獯鹨幌拢?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/tongue.gif" align="absmiddle" border="0"> |
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brightfuture01
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西瓜(金幣+5): Good！連樓下一貼一起授予EPI！ 2011-11-28 10:54:25
西瓜(金幣+5): Good！連樓下一貼一起授予EPI！ 2011-11-28 10:54:25
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你做SDS-PAGE的目的是什么？無(wú)非是想正確反映你組織里面蛋白的組成或者定位某蛋白的大小等原因，你的蛋白都降解了，那你跑這個(gè)電泳還有什么意義？PMSF是配成100mM的貯液，使用時(shí)的終濃度是1mM，所以體積應(yīng)該也占不了多少，對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有什么明顯影響。 PMSF在水中的半衰期是半個(gè)小時(shí)左右。為啥不是破完組織，測(cè)完濃度馬上跑電泳呢？這些實(shí)驗(yàn)一上午都用不了應(yīng)該就能就輕松做完了的。跑電泳的那點(diǎn)點(diǎn)樣品應(yīng)該還是有的吧？20ul 就足夠了... |
6樓2011-11-25 21:52:34
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兄弟你用藥品從來(lái)不看是水溶性的還是溶于有機(jī)溶劑的么？2樓2011-11-25 18:00:13
3樓2011-11-25 21:05:09
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嗯 是的 這一塊之前我就感覺(jué)非常模糊 首先我有個(gè)問(wèn)題要請(qǐng)教 降解帶來(lái)的后果是什么，后面我是用蛋白的粗提液來(lái)做SDS-PAGE，降解與否會(huì)帶來(lái)不一樣的結(jié)果嗎？其次，我提的幼蟲(chóng)的血淋巴非常少，然后把它溶在緩沖液里，稀釋的倍數(shù)是一定的，這樣，問(wèn)題來(lái)了，那我加入的帶有PMSF的乙醇算不算稀釋液呢？第三，PMSF那么快就降解完了，我要不停的加嗎，因?yàn)樵囼?yàn)關(guān)系，要保留一段時(shí)間才能做電泳。但是一直加也不現(xiàn)實(shí)啊！ 謝謝解答  |
4樓2011-11-25 21:35:32
5樓2011-11-25 21:36:41
7樓2011-11-25 22:21:06
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8樓2011-11-25 22:29:34
9樓2011-11-26 22:09:02
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10樓2011-11-26 22:38:35
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