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審稿意見求助，關(guān)于ELISA法，謝謝！
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paper審稿意見回來了，其中有一點不是很明白，請各位大蝦幫幫忙，先謝謝了�。。�！ 我的論文里有個實驗是用ELISA法（不是用試劑盒）測定血清中流感病毒特異性抗體IgG的含量，方法如下： 用流感病毒液（病毒滴度為105.0 TCID50/mL）包被96孔板，4℃下保存16h。在包被孔中加入50μl 的1%小牛血清-含0.05%吐溫20 PBS溶液（PBST），然后分別加入50μl不同稀釋度的小鼠血清，設(shè)復(fù)孔、陰性對照，37℃下培養(yǎng)1h。用PBST洗三次，加入l：200 HRP標(biāo)記的羊抗小鼠lgG抗體，培養(yǎng)1h后用PBST洗板，每孔加入50μl的OPD-H202底物顯色，用H2SO4終止反應(yīng)�？瞻渍{(diào)零后，在酶標(biāo)儀上測定各孔的光密度（405 nm）。然后我將各組的OD值均數(shù)作圖放在結(jié)果上。 審稿人提出 “data should not be presented as OD but rather in absolute values (i.e. pg/ml or IU)” 我以前沒做過ELISA，這個實驗如果要測出病毒特異性抗體的含量，應(yīng)該是要用特異性抗體（明確含量）的血清做標(biāo)準(zhǔn)曲線吧？但是這樣是不是要純化病毒特異性抗體呢？還是用普通的小鼠抗體IgG加入血清做標(biāo)準(zhǔn)曲線即可呢？ 有哪位蟲友做過這方面的實驗?zāi)兀? |
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Tracyli(金幣+5): 謝謝！ 2011-11-25 16:06:59
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Tracyli(金幣+5): 謝謝！ 2011-11-25 16:06:59
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1.審稿人提出的問題的意思是：你在文中表述數(shù)據(jù)結(jié)果的時候不應(yīng)該是OD值，應(yīng)該是你測定的目標(biāo)抗體的含量，就是要把你測定的OD值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算成抗體含量（單位用pg/ml或者是國際單位） 2.你關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的疑惑： 你的目的是要測定流感病毒特異性抗體，所以你肯定要用流感病毒特異性抗體（已知濃度）來坐標(biāo)準(zhǔn)曲線。 這一點我能肯定。 另外，是不是需要純化的病毒特異性抗體，從理論上來說，應(yīng)該是要純化的，但是我沒有做過。這一點我不能確定。抱歉。 |
2樓2011-11-25 13:40:33
3樓2011-11-25 16:15:04
grandstone
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