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cheauyn鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
發(fā)酵罐染菌問(wèn)題
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現(xiàn)在在做一項(xiàng)目，一上罐子就染菌，搖瓶一點(diǎn)問(wèn)題都沒(méi)有。5L，7L，30L都試過(guò)，每個(gè)罐子都染。由于培養(yǎng)基滅菌不透徹，里面最有可能的就是5%的黃豆餅粉(其他的都單獨(dú)試過(guò)，沒(méi)有問(wèn)題)，想請(qǐng)各位大俠幫幫忙，這種問(wèn)題怎么解決啊？~~~急~~~急 另， 1） 已試過(guò)將黃豆餅粉單獨(dú)在滅菌前煮沸1-2h，發(fā)酵后期仍有染菌現(xiàn)象； 2）黃豆餅粉水解后過(guò)濾，可解決，但是菌種生長(zhǎng)受到限制。 不知各位是否有更好的辦法解決？ |
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thiophene9859
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【答案】應(yīng)助回帖
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cheauyn(金幣+2): 謝謝！ 2011-11-30 10:17:58
zhang8826857(金幣+1): 寫(xiě)了這么多，獎(jiǎng)勵(lì)熱心蟲(chóng)子 2011-11-30 11:15:47
cheauyn(金幣+2): 謝謝！ 2011-11-30 10:17:58
zhang8826857(金幣+1): 寫(xiě)了這么多，獎(jiǎng)勵(lì)熱心蟲(chóng)子 2011-11-30 11:15:47
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一般來(lái)說(shuō)黃豆粉不存在滅菌不透的問(wèn)題，如果懷疑黃豆粉，搖瓶實(shí)驗(yàn)有沒(méi)有添加黃豆粉？搖瓶實(shí)驗(yàn)要是添加了黃豆粉沒(méi)有染，就說(shuō)明不是黃豆粉的問(wèn)題。檢驗(yàn)搖瓶種子有沒(méi)有染菌顯微鏡檢測(cè)在雜菌濃度低的時(shí)候不可靠，建議采用平板涂布。 如果種子沒(méi)有問(wèn)題，罐體密封性沒(méi)有問(wèn)題。做個(gè)設(shè)備驗(yàn)證，在發(fā)酵罐中隨便加點(diǎn)葡萄糖、蛋白胨，滅菌后不接種，通氣，如果還染菌就說(shuō)明是空氣系統(tǒng)的問(wèn)題。如果空氣系統(tǒng)有問(wèn)題，空壓機(jī)是否定期排水？油水分離器是否良好工作，都沒(méi)有問(wèn)題嘗試更換空氣過(guò)濾器，小罐過(guò)濾器便宜，幾十塊一個(gè)。 |
7樓2011-11-30 09:10:16
【答案】應(yīng)助回帖
★
cheauyn(金幣+2): 很有道理，罐子應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。過(guò)濾器，濾芯全都換過(guò)新的，而且之前也做過(guò)其他的菌種，沒(méi)有問(wèn)題。感覺(jué)問(wèn)題可能出在黃豆餅粉上。 2011-12-01 08:36:44
zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)熱心蟲(chóng)子 2011-12-01 09:23:23
cheauyn(金幣+2): 很有道理，罐子應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。過(guò)濾器，濾芯全都換過(guò)新的，而且之前也做過(guò)其他的菌種，沒(méi)有問(wèn)題。感覺(jué)問(wèn)題可能出在黃豆餅粉上。 2011-12-01 08:36:44
zhang8826857(金幣+1): 鼓勵(lì)熱心蟲(chóng)子 2011-12-01 09:23:23
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一般來(lái)說(shuō)你這種情況，發(fā)酵前期、中期都有污染。 前期污染：①有可能空氣系統(tǒng)有問(wèn)題、②設(shè)備有問(wèn)題（發(fā)酵罐或者管道存在死角，滅菌滅不到)、③培養(yǎng)基滅菌不徹底。 中期污染：最大可能性就是黃豆粉存在結(jié)塊，黃豆粉小疙瘩滅不透。 建議你不要盲目上罐，徹底清查出染菌原因，你已經(jīng)做過(guò)搖瓶驗(yàn)證種子應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題。建議你仔細(xì)檢查下發(fā)酵設(shè)備，發(fā)酵罐看看有沒(méi)有死角，空氣過(guò)濾系統(tǒng)是否完善，過(guò)濾器、濾芯都要檢查，培養(yǎng)基當(dāng)中的黃豆粉，在上罐前用水浸泡，浸泡個(gè)1到2小時(shí)，在攪拌，做到黃豆粉不結(jié)塊。這些都弄好，做1—2次空白培養(yǎng)，12h、24、36看看效果，是否染菌。空白培養(yǎng)做到不染菌在上菌種培養(yǎng)，在上罐中做下?lián)u瓶同步培養(yǎng)驗(yàn)證。 個(gè)人已經(jīng)僅供參考 |
9樓2011-11-30 12:44:37
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【答案】應(yīng)助回帖
cheauyn(金幣+2): 謝謝！其實(shí)這也試過(guò)，不過(guò)效果不是很理想，而且考慮到以后如果放大生產(chǎn)，這也不是個(gè)長(zhǎng)久之計(jì)�，F(xiàn)在滅菌都已經(jīng)溫度更高了，時(shí)間基本都是在30min以上之45min，可仍舊存在染菌問(wèn)題，頭大了~~~ 2011-11-29 14:45:57
| 將黃豆餅粉單獨(dú)滅菌，發(fā)酵前和種子一起加進(jìn)去。罐按照121度，20min滅菌，也可以在滅罐之前給發(fā)酵罐空滅一次，溫度可以高一點(diǎn)，時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)。 |
2樓2011-11-29 14:40:11
3樓2011-11-29 22:41:24
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4樓2011-11-30 07:05:00
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5樓2011-11-30 08:30:30
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8樓2011-11-30 09:12:03
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10樓2011-11-30 13:39:00
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