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yanying198新蟲 (小有名氣)
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[求助]
聚乙烯亞胺沉淀去除核酸
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| 我有一蛋白結(jié)合核酸，試過DNAase,RNAase,也試過高低鹽交替沖洗，還試過Hitrap(肝素柱子)效果都不好，現(xiàn)在想用PEI（聚乙烯亞胺）沉淀法，我想問的是我需要買多大聚合度的PEI，分子量大約多少？我的蛋白也是酸性的，是不是一起沉淀下來了？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
yanying198(金幣+5): 2011-12-04 17:42:09
| 在細(xì)胞破碎的上清中加入，polyethylenimine聚乙烯亞胺（25 kD，Sigma 公司），離心，因?yàn)榈鞍缀秃怂崾且煌籔EI沉淀下來的，然后再用高鹽洗脫蛋白質(zhì)，而DNA和PEI結(jié)合很緊密，所以還是在沉淀里面。這樣一來，好多垃圾蛋白和核酸都被去掉了。到了這一步，還有一個(gè)問題。就是洗脫下來的蛋白里面還有PEI, 如果現(xiàn)在就用透析的辦法降低鹽濃度，PEI和蛋白會(huì)重新形成沉淀。所以下一步就是用硫酸胺沉淀的辦法把蛋白和PEI分開。用低鹽buffer重溶沉淀的蛋白,再過親合柱就行了。 |
2樓2011-12-03 16:30:48
yanying198
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3樓2011-12-04 20:38:42
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5樓2013-04-03 11:02:46
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