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酶促動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定
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| 各位蟲(chóng)友，小女子現(xiàn)在正在做酶的動(dòng)力學(xué)研究，對(duì)于同一種底物，反應(yīng)條件相同，為什么每次得到的Km值不同，有時(shí)得到的是6-10mmol/L，有時(shí)又是40-60mmol/L，想請(qǐng)問(wèn)你們?cè)谧龅臅r(shí)候，都需要注意些什么呢？底物濃度范圍以般都怎么選��？ |
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yhsun8033
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【答案】應(yīng)助回帖
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linyingjia(金幣+2): 不錯(cuò) 2011-12-05 19:15:48
含章冰嬋(金幣+2): 2011-12-18 00:04:02
linyingjia(金幣+2): 不錯(cuò) 2011-12-05 19:15:48
含章冰嬋(金幣+2): 2011-12-18 00:04:02
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一般來(lái)說(shuō)，兩次測(cè)定Km值有3-5倍的差別都是在允許范圍內(nèi)的，樓主兩次測(cè)定相差將近10倍我覺(jué)得可以下從以下兩個(gè)方面檢查： 1. 樓主的測(cè)活體系中是不是有不穩(wěn)定因素，如酶，如果兩次用的酶不是一個(gè)批次，或者同批次酶放久部分失活了都可能導(dǎo)致這種差別；底物是不是在反應(yīng)體系中不穩(wěn)定，容易降解或者失活的等等 2.樓主計(jì)算Km時(shí)采取什么方法，如果純手動(dòng)原始計(jì)算，那么雙倒數(shù)計(jì)算時(shí)斜率的一點(diǎn)變化就容易對(duì)Km的結(jié)果產(chǎn)生很大的影響 總之，建議樓主從細(xì)節(jié)處檢查找找原因。 |
2樓2011-12-02 13:20:23
yhsun8033
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3樓2011-12-02 13:22:03
liuyuexinfei
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【答案】應(yīng)助回帖
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Km值實(shí)際上反應(yīng)的是酶與底物之間的親和力，所以在理論上酶濃度的變化不會(huì)影響Km值的測(cè)定。我所說(shuō)的酶失活影響Km值主要是指如果酶的構(gòu)想發(fā)生變化（有時(shí)候反映為部分活性喪失），那么底物與其的親和力也會(huì)發(fā)生變化，也就是說(shuō)Km至?xí)凶兓?br /> 如果計(jì)算Km值時(shí)直接按照最大反應(yīng)速度一半時(shí)的底物濃度來(lái)讀取時(shí)不準(zhǔn)的，要按照幾個(gè)做圖法（如雙倒數(shù)）或者直接由軟件（如Prism或者GraFit）計(jì)算才準(zhǔn)確。 |
7樓2011-12-05 16:26:18
firelion2006
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8樓2011-12-15 22:10:14
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10樓2012-07-31 17:54:21
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