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[求助]
酶促動力學(xué)參數(shù)測定
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| 各位蟲友，小女子現(xiàn)在正在做酶的動力學(xué)研究，對于同一種底物，反應(yīng)條件相同，為什么每次得到的Km值不同，有時得到的是6-10mmol/L，有時又是40-60mmol/L，想請問你們在做的時候，都需要注意些什么呢？底物濃度范圍以般都怎么選取？ |
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yhsun8033
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3樓2011-12-02 13:22:03
yhsun8033
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
linyingjia(金幣+2): 不錯 2011-12-05 19:15:48
含章冰嬋(金幣+2): 2011-12-18 00:04:02
linyingjia(金幣+2): 不錯 2011-12-05 19:15:48
含章冰嬋(金幣+2): 2011-12-18 00:04:02
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一般來說，兩次測定Km值有3-5倍的差別都是在允許范圍內(nèi)的，樓主兩次測定相差將近10倍我覺得可以下從以下兩個方面檢查： 1. 樓主的測活體系中是不是有不穩(wěn)定因素，如酶，如果兩次用的酶不是一個批次，或者同批次酶放久部分失活了都可能導(dǎo)致這種差別；底物是不是在反應(yīng)體系中不穩(wěn)定，容易降解或者失活的等等 2.樓主計算Km時采取什么方法，如果純手動原始計算，那么雙倒數(shù)計算時斜率的一點變化就容易對Km的結(jié)果產(chǎn)生很大的影響 總之，建議樓主從細節(jié)處檢查找找原因。 |
2樓2011-12-02 13:20:23
liuyuexinfei
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4樓2011-12-02 18:32:17
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