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鮮鮮橙多木蟲 (小有名氣)
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[求助]
HPLC的C18柱堵塞，求解決方法
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我前幾天在用HPLC 的C18柱走蛋白，蛋白用生理鹽水溶解，流動相是雙蒸水。后來，有別人用甲醇走樣品。她用完后，我用80%的甲醇沖洗了好久。然后直接以80%的甲醇做洗脫液，上樣品，我想看看能走出啥峰來。結(jié)果，剛上完樣品，柱子壓力就超標(biāo)了。分段檢查上樣的管和柱子都堵了。上樣管，后來沖洗通了，但是柱子還是堵得。我在網(wǎng)上查得說根據(jù)樣品液不同，不走檢測器，反方向，用高濃度和低濃度的有機(jī)溶液低流速沖洗。我周五開始用80%的甲醇沖，0.1-0.3ml/min。壓力還是很大，我昨天又用20%的甲醇沖洗，依舊無效。求解�。。�！ PS：柱子用了有一段時間了，平時流速就不超過0.6ml/min。 |
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3樓2011-12-04 20:26:08
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送鮮花一朵 |
一是，流速上不去，打開柱子的另一側(cè)，流速調(diào)到0.7ml/min，壓力就達(dá)到18了，設(shè)置的最高壓力是20。 二，蛋白分子量應(yīng)該是很小，其實(shí)也不算蛋白，硫酸銨沉淀后的上清液通過一系列的處理，走HPLC。猜測是多肽類物質(zhì)，等電點(diǎn)什么的根本不知道( ⊙ o ⊙ )�。� 之前這個樣品走HPLC2,3個周了，沒有問題。這次是別的實(shí)驗(yàn)室的人借我們實(shí)驗(yàn)室的儀器走她們的樣品，估計(jì)走完了也沒用緩沖液沖洗，我第二天走緩沖液，開始都還好，結(jié)果剛上了一針樣品，立馬堵了。 愁，還不敢告訴老師。前幾天剛花了1千多修了在線脫氣機(jī)。 |
4樓2011-12-04 21:06:14
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