 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 473 | 回復(fù): 0 | ||
juneinsect新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
【求助】AFLP選擴(kuò)片段太大，酶切不徹底
|
|
各位師兄師姐，我做蚯蚓AFLP，最近碰到一些問(wèn)題想請(qǐng)大家指教。下面三張膠圖，圖1，圖2，圖3分別是我做gDNA酶切，預(yù)擴(kuò)增，選擴(kuò)增（篩引物）的圖片。圖1圖2（酶切和預(yù)擴(kuò)增）的maker是MakerI，圖3（選擴(kuò)增）的maker是maker100bp plus。 我的困惑是，請(qǐng)各位大俠看看我的酶切是否已經(jīng)完全？為何選擴(kuò)增片段會(huì)這么大？選擴(kuò)增片段在多少為宜？要想選擴(kuò)增片段變小應(yīng)該采取什么改進(jìn)措施呢？ 我用的內(nèi)切酶組合分別是：EcoRI+MseI，EcoRI+MspI，EcoRI+HpaII。MspI和HpaII的酶切位點(diǎn)都是GGCC。  圖1圖1從左到右分別是：EcoRI+MseI雙酶切，EcoRI+MspI雙酶切，EcoRI+HpaII雙酶切，gDNA，MakerI 用的NEB的酶，酶切時(shí)間3h，Buffer分別用的是NEB4，NEB4，NEB1。另外，想解釋一下，600bp左右的亮條帶應(yīng)該是RNA。 [img]http://img.dxycdn.com/upload/2011/12/03/32/98405763.snap.jpg[/url][/img]圖2 預(yù)擴(kuò)增條件：94℃ 30S， 56℃ 1min， 72℃ 1min，21個(gè)循環(huán)。 跑膠條件：瓊脂糖濃度2%,100V，20min 我感覺(jué)擴(kuò)增最亮的片段在300bp-400bp之間。   圖3選擴(kuò)增條件：94℃ 30S， 65℃ 1min， 72℃ 1min，12個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)退火溫度下降0.7℃；94℃ 30S， 56℃ 1min， 72℃ 1min，23個(gè)循環(huán). 跑膠條件：瓊脂糖濃度4%,80V，1h請(qǐng)問(wèn)各位高手，瓊脂糖跑出來(lái)這樣的選擴(kuò)產(chǎn)物能否做PAGE電泳了？  我的困惑是，請(qǐng)各位大俠看看我的各個(gè)步驟都有什么問(wèn)題，特別是酶切是否完全？為何選擴(kuò)增片段會(huì)這么大？選擴(kuò)增片段在多少為宜？要想選擴(kuò)增片段變小應(yīng)該采取什么改進(jìn)措施呢？ 另外還想請(qǐng)教各位，選擴(kuò)產(chǎn)物做測(cè)序膠電泳好還是跑測(cè)序儀好，哪里可以做這樣的服務(wù)呢？ [ Last edited by juneinsect on 2011-12-7 at 10:11 ] |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有208人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復(fù)
找到一些相關(guān)的精華帖子，希望有用哦~
AFLP酶切連接 求高人指點(diǎn)啊
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 看不見(jiàn)酶切后的小片段
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 將質(zhì)粒上緊挨著的兩個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 雙酶切的片段不見(jiàn)了？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 有做AFLP的么？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 關(guān)于雙酶切無(wú)目的片段
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 129bp小片段從pGEM-T上酶切回收的問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 雙酶切的選擇
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【分享】[12-21]精挑細(xì)選綠色軟件推薦下載[清清心整理]【已搜索無(wú)重復(fù)】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】片段轉(zhuǎn)進(jìn)去，提質(zhì)粒酶切發(fā)現(xiàn)載體小了，想不明白
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】AFLP求助，選擴(kuò)始終不能擴(kuò)出條帶，有圖
已經(jīng)有13人回復(fù)
點(diǎn)擊這里搜索更多相關(guān)資源科研從小木蟲開(kāi)始，人人為我，我為人人
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 juneinsect 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
材料學(xué)碩，求調(diào)劑
 6+4
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +10 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +6 | NIFFFfff 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠(chéng)心求調(diào)劑 +15 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二 +5 | leaflight 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4 | Higraduate 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開(kāi)頭均可，過(guò)線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問(wèn)津 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +5 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 26研0 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269專碩求調(diào)劑 +6 | 金恩貝 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來(lái)好運(yùn)來(lái)來(lái)來(lái) 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂(lè)29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|